大鼠蛋白激酶G-II型(PKG-II)ELISA試劑盒實驗使用說明書

產(chǎn)品規(guī)格：96T/48T

用途：用于科研實驗。

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存： 2-8℃。

2.有效期： 6個月

供貨能力：現(xiàn)貨，可根據(jù)客戶需求批量訂制生產(chǎn)。 公司經(jīng)營的ELISA檢測試劑盒種類齊全，

可以檢測：人、大鼠、小鼠、豚鼠、倉鼠、裸鼠、馬鈴薯、鹿、羊、雞、鴨、魚、兔子、豬、犬、猴、馬、牛等動植物。

均為現(xiàn)貨，支持快遞包郵，試劑盒提供免費代測服務(wù)

用途

該試劑盒用于體外定量檢測血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度。

檢測原理

本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標板上，實驗時樣品或標準品中的抗原會與包被抗體結(jié)合，游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過氧化物酶標記的親和素。抗體與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物，游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB)，TMB在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標儀在450nm波長處測OD值，抗原濃度與OD450值之間呈正比，通過繪制標準曲線計算出樣品中指標的濃度。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)

沉淀，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。檢測細胞內(nèi)的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。標本融化后仍然保?-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

大鼠elisa檢測試劑盒組成及保存

未拆封的試劑盒可在4℃保存一周;如果一周以后才使用試劑盒，請拆開試劑盒按照下表中的條件分別保存各組分。

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置

說明書 1份 1份

封板膜 2片 2片

密封袋 1個 1個

酶標包被板 1&;48 1&;96

標準品 0.3ml 6管 0.3ml;6管

酶標試劑 5 ml;1瓶 10 ml;1瓶

樣品稀釋液 3 ml;1瓶 6 ml×1瓶

顯色劑A液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

顯色劑B液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

終止液 3 ml;1瓶 6 ml;1瓶

20×濃縮洗滌液 15ml;1瓶 25ml;1瓶

試劑盒組成 48孔配置 96孔配置

說明書 1份 1份

封板膜 2片 2片

密封袋 1個 1個

說明：所有試劑瓶蓋須旋緊以防止蒸發(fā)和微生物的污染。

試劑體積以實際發(fā)貨版說明書為準。相關(guān)試劑在分裝時會比標簽上標明的體積稍多一些，請在使用時量取而非直接倒出。

大鼠elisa檢測試劑盒操作步驟

1. 標準品的加樣：設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;。

2. 加樣：分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl(樣品稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

9. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

試驗所需自備物品

1. 酶標儀(450nm波長濾光片)

2. 高精度移液器，EP管及一次性吸頭：0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL

3. 37℃恒溫箱，雙蒸水或去離子水

4. 吸水紙

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。