- 2025-04-25 14:14:09酶標記抗體
- 酶標記抗體是一種生物技術產品，通過將酶分子與抗體分子結合而成。這種結合保留了抗體的免疫活性及酶的催化活性，可用于酶聯免疫吸附試驗（ELISA）等免疫學檢測方法中。酶標記抗體能夠特異性地識別并結合目標抗原，同時其結合的酶可催化底物顯色，從而實現對目標抗原的定性或定量檢測，具有高度的特異性和敏感性。
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酶標記抗體問答
- 2021-09-01 11:46:11化學發光試劑吖啶酯在抗體蛋白上的標記
- 診斷試劑中化學發光底物吖啶酯的標記原理化學發光免疫檢測中，我們用吖啶酯先標記上抗體蛋白，才能在免疫反應后對待測物進行檢測，因此如何標記抗體就非常的關鍵了。吖啶鹽和相關化合物已被廣泛證明為非常有用的化學發光標記物，其穩定性、標記特異性和檢測靈敏度都超越放射性同位素。吖啶酯-NHS即吖啶琥珀酰亞胺酯(本試劑盒所提供)能與蛋白質的一級氨基發生反應。在堿性條件下，NHS作為離去基團被取代，蛋白質與吖啶酯形成穩定的酰胺鍵。反應完成后，多余的吖啶鹽通過脫鹽柱除去。在堿性過氧化氫存在下，吖啶標記的蛋白不需要酶催化就可自行發光。因此激發液的加入導致反應體系立即釋放約430nm的光子，通過使用標準光度計luminometer計數光子數量就可檢測蛋白質的濃度。因為此發光過程是十分短暫(整個過程在2秒鐘內完成)，樣品必須直接放在光度計內部光子探測器前面。蛋白質、多肽、抗體、核酸都可以用吖啶酯標記。化學發光試劑這里需要注意的是，溶解吖啶琥珀酰亞胺酯時，使用的DMF必須嚴格無水，防止吖啶酯水解不使用時，干燥密封-20°℃保存。針對傳統吖啶酯，在其結構上進行了修飾，增大了位阻，增強了抗水解性。如在室溫下，在pH為7.0的PB緩沖液中很穩定。如果是不含-NHS的吖啶羧酸需要加入縮合劑EDCI等，才能與含胺基的蛋白發生偶聯反應。吖啶酰肼，含有游離氨基，吖啶酰肼末端適用直接偶聯含有醛基的多糖核酸或者蛋白質等。德晟自05年就開始研發生產血液檢測體外診斷方面試劑，對新型Trinder's試劑、生物緩沖劑及化學發光試劑有著較深的研究,專業的研發團隊和生產設備，目前，公司的生產設備、工藝和流程都是新升級的。每一件產品都經過專業質量人員檢測認證，確保產品質量。可以放心購買。歡迎詢價。
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- 2023-12-25 17:14:18重組抗體的類型有哪些？
- 重組抗體，也被稱為重組免疫球蛋白，是通過基因工程技術將抗體的基因在合適的宿主細胞中表達并生產出來的一類抗體。與傳統的多克隆抗體和單克隆抗體相比，重組抗體具有更高的特異性和親和力，并且可以針對特定的抗原表位進行設計和優化。重組抗體的類型包括嵌合抗體、雙特異性抗體、抗體片段和Fc融合蛋白等。下面一起來看一下他們各種的應用：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview①嵌合抗體1975年，雜交瘤技術的發現徹底改變了抗體研究和臨床開發。然而，鼠源性抗體的療-效受到人抗鼠抗體（HAMA）效應的限制，鼠源性單抗對人體具有異種蛋白的免疫原性 ,在人體內半衰期較短。1984年，研究人員通過基因工程構建了第一個嵌合抗體，也是公認的第一種重組抗體，以降低鼠源抗體在人體內的免疫原性。其中，約30%-35%的分子來源于小鼠的抗體序列，約65%-70%來源于人的抗體序列。所得嵌合抗體保留了親代小鼠抗體的抗原結合能力。抗體嵌合是開發治-療性人源化抗體的第一步。義翹神州采用CDR移植技術和計算機輔助分子建模，提供高質量的單克隆抗體人源化服務，成功率高，人源化程度>90%。②抗體片段每一個完整的免疫球蛋白（IgG）分子包含通過二硫鍵連接的兩條重鏈和兩條輕鏈。抗體片段（如Fab、scFv和VHH）體積小，比其全長抗體具有更好的組織或腫瘤穿透力。因此，它們在免疫治-療方面具有巨大的前景，尤其是在實體瘤方面。此外，它們的半衰期也較短，可用作放射性顯像劑。然而，由于缺乏Fc區，它們不能引起Fc介導的抗體效應功能，如抗體依賴性細胞毒性（ADCC）和補體依賴性細胞毒性（CDC）。起初采用酶解法對IgG抗體進行片段化。胃蛋白酶作用于鉸鏈區二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C端，水解產生被稱為F(ab’)2的二價Fab片段。然后，通過木瓜蛋白酶將該片段裂解為兩個相同的Fab片段。然而，酶解法限制了可制備的抗體片段類型，而且不適合工業化大規模生產和純化。隨著抗體工程技術的進步，這些問題可以通過重組生產抗體片段來解決。抗體基因克隆測序成功后，可通過瞬時轉染在原核表達系統（如大腸桿菌）和哺乳動物系統（HEK293細胞）中表達抗體片段。憑借豐富的重組生產經驗，義翹神州建立了高通量VHH表達平臺，交付了多個VHH抗體生產項目，總體成功率超過90%。除了常見的VHH形式，我們還可以表達雙特異和多特異VHH。此外，義翹神州還可以表達其他各種高特異性和親和力的抗體片段，如scFv和Fab。③雙特異性抗體與常規單克隆抗體不同，雙特異性抗體（bsAb）具有兩個結合位點，可識別同一抗原上兩個不同抗原或表位。由于這一特性，雙特異性抗體備受研究者和制藥業的關注。截止目前，美國食品藥品監督管理局（FDA）已批準了4種雙抗藥物，而且160多種雙抗正在進行臨床試驗，用于治-療癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和其他疾病。起初，雙特異性抗體通過四源雜交瘤技術制備，但這對下游抗體生產和純化構成了巨大的挑戰。隨著過去20年重組DNA技術的發展，出現了幾種雙特異性抗體形式，以適應所需的靶標-產品特征。為了解決重鏈錯配問題，Genentech首先提出了“knob-into-hole”（KiH）技術，該技術通過對CH3結構域進行改造，在每條重鏈中創建一個“knob”或一個“hole”，以誘導異源二聚化。同樣地，研究人員也采用了common light chain 和CrossMab等其他技術來解決輕鏈錯配問題。表達雙特異性抗體主要在哺乳動物細胞中進行。由于單克隆抗體和雙特異性抗體之間的各種結構相似性，許多已建立的常規單抗純化工藝也可適用于雙特異性抗體。（參見另一篇文章：“雙特異性抗體：抗體治-療中的新星”）④Fc融合蛋白Fc融合蛋白（又稱Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc標簽蛋白）是一種同源二聚體，由免疫球蛋白的Fc段與具有生物學活性的蛋白分子組成。雖然單克隆抗體是治-療性生物制劑開發的重-點，但Fc融合蛋白也是一類成功的生物制藥產品，至少有13種藥物獲得了歐洲藥品管理局（EMA）和美國FDA的批準。除治-療應用外，Fc融合蛋白還是基礎研究中的檢測試劑，包括流式細胞術、免疫組織化學和蛋白結合試驗。事實上，與Fc區的連接可以提高一些結合蛋白的溶解度和穩定性。鑒于其大小和對糖基化的需求（大多數是糖蛋白），Fc融合蛋白主要在哺乳動物表達系統中產生。目前，抗體工程技術取得了一定的進步，這極大地促進了各種形式重組抗體的開發，用于疾病治-療。FDA已批準了100多種抗體藥物，目前有多種抗體處于臨床后期開發階段。此外，重組抗體還可用于許多研究應用：蛋白免疫印跡（WB）、免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）、流式細胞術（FC）和表面等離子體共振（SPR）。總之，重組抗體是基因工程技術的重要應用之一，其類型多樣，具有廣泛的應用前景。隨著基因工程技術的發展，重組抗體的生產成本和安全性問題也將得到進一步優化，為臨床治-療和科學研究提供更多有效的工具。同時，我們也應該認識到重組抗體的潛在風險和挑戰，加強對其安全性和有效性的評估和監管，以確保其能夠更好地服務于人類的健康事業。更多重組抗體詳情關注：https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats
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- 2024-01-16 16:35:20免疫組化抗體（IHC）的實踐應用與常見問題詳解
- 免疫組化法（IHC）是使用抗體檢測組織切片（例如肝臟、胰-腺或心臟）中細胞蛋白質（抗原）的過程。 當組織樣本被送到實驗室進行疾病檢查時，有幾個細節不易確定。幾種疾病或疾病亞型在顯微鏡下可能看起來相似或看起來具有相似大小的細胞，但具有不同的行為和必要的治-療，區分它們的最佳方法是檢測這些細胞上作為標記的特定分子。免疫組化法（IHC）是一種使用抗體（匹配分子）的技術，用于尋找、識別附著在細胞上的標記物。在顯微鏡下可以看到抗體本身，這有助于技術人員進行精確識別。 免疫組化法（IHC）已廣泛應用于醫學中，特別是癌癥診斷。淋巴瘤是依賴于IHC進行正確診斷和治-療決策的癌癥之一。 免疫組化常見問題：問題一：我應該使用PIER還是HIER進行抗原修復？ 固定過程可能會掩蓋抗原，導致抗體結合無法進行。這種掩蓋可以通過一種稱為抗原修復/抗原去掩蔽的技術來逆轉，該技術可以通過加熱（HIER；熱誘導抗原修復）或蛋白酶（PIER；蛋白水解誘導抗原修復）介導。后者使用蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。PIER方法通過降解掩蓋表位的肽而起作用。然而，PIER也可能導致樣品形態或抗原本身的改變。因此，PIER的使用頻率低于HIER，后者通過恢復表位的二級和三級結構而起作用。為了確定是否應該進行抗原修復以及采用哪種方法，應遵循以下指南：進行文獻檢索，以確定其他研究人員如何可視化您感興趣的抗原。檢查抗體供應商是否推薦了特定的抗原修復-方案。如果沒有特定的協議可用，我們建議使用HIER而不是PIER協議。對于HIER，總是使用中性抗原修復緩沖液，并與未進行抗原修復的樣品進行比較。如果中性染色溶液沒有產生良好的染色效果，則應測試堿性或酸性抗原修復緩沖液。除了pH值外，其他需要優化的參數是溫度和持續時間。理想情況下，嘗試各種pH值、溫度和時間組合。為了排除由HIER過程引起的偽影，始終包括一個控制樣品，該樣品在沒有HIER步驟的情況下進行染色。 問題二：如何選擇IHC實驗的抗體，單克隆抗體還是多克隆抗體？ 單克隆抗體和多克隆抗體的抗體特性決定了其優缺點。單克隆抗體是針對單個表位的同種免疫球蛋白。抗體是由一個動物的單個B細胞克隆產生的，因此在免疫化學上相似。多克隆抗體是針對同一抗原的各種表位的異質抗體混合物。抗體是由動物的不同B細胞克隆產生的，因此在免疫化學上不同。多克隆混合物中的抗體可能具有略微不同的特異性和親和力。 如果蛋白質靶標具有相同的氨基酸序列，單克隆抗體更合適。一旦抗原因各種原因發生構象變化，如蛋白質相互作用、翻譯后修飾、溫度、pH值、固定、鹽濃度等，單克隆抗體和抗原的聯合作用將受到嚴重影響。由于多克隆抗體具有多個表位，不受蛋白質構象變化的影響，一般來說，在一定范圍內的pH和鹽濃度內，多克隆抗體之間的抗原結合比單克隆抗體更穩定。 問題三：一抗的孵育時間多久？一抗的孵育時間與溫度,抗體濃度有關。一般情況下,在37℃的條件下,孵育1-2小時左右。在室溫的條件下,孵育3小時左右。在4℃的條件下,孵育18-24小時左右。 義翹神州提供石蠟切片免疫組化（IHC）檢測服務，更多免疫組化的問題可以上義翹神州網咨詢！https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service
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- 2022-07-22 15:27:25熒光定量PCR實驗，熒光標記怎么選？
- 熒光定量PCR技術是將常規的PCR和熒光檢測技術相結合，利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程，以此實現對初始模板的定量分析。熒光定量PCR技術作為當今生物學研究的重要手段之一，在基礎科學、生物技術、醫學研究、法醫學、診斷學等多方面具有廣泛的應用前景。說到熒光定量PCR技術，我們經常會問類似于“你的實驗是染料法還是探針法”，“你用的探針是什么類型”等之類的問題，這其實是對熒光標記的選擇。根據熒光標記的不同，可以將熒光定量PCR實驗分為探針法和染料法兩大類。染料法染料法利用能與DNA雙鏈結合的染料來實現，如SYBR Green I。該染料在游離狀態下呈現微弱的熒光，一旦與雙鏈DNA的雙螺旋小溝結合，其綠色熒光增強約1000倍。因此其總的熒光強度與雙鏈DNA含量成正比，利用這一關系可以反映生成的PCR產物的量（圖 1）。SYBR Green I的吸收約在497 nm，發射波長約在520 nm，與FAM熒光分子的光譜性質類似，因此在所有的熒光定量PCR設備中都是通道檢測，即“FAM/SYBR Green I”通道。▲ 圖1 染料法原理圖理論上，所有能與雙鏈DNA結合的染料都可以用于qPCR檢測，如溴化乙錠EtBr，碘化丙啶PI，吖啶橙、Cy3等。而選擇用于qPCR反應的染料通常會從信號強度、生物安全性、檢測簡便性和經濟適用性這幾個因素考慮。例如EtBr可能存在潛在的致癌性。綜合考慮下來，SYBR Green I成了比較理想的選擇。目前，使用Evagreen的實驗者也越來越多，Evagreen作為一種新型的染料，其光譜性質與SYBR Green I類似，其優勢在于：? 對PCR反應的抑制程度小。高濃度SYBR Green I會強烈抑制PCR反應，因此要控制其使用濃度，一定程度上降低了DNA檢測的靈敏度。? 與DNA結合密度高。單位長度的DNA雙鏈上Evagreen的密度更高，為飽和型染料，消除了SYBR Green I存在的“染料重分布”的缺陷，提高檢測靈敏度的同時也可用于高分辨率溶解曲線HRM。? 化學性質更穩定，適合長期保存。TaqMan 探針TaqMan 探針基本可以滿足60%以上的qPCR實驗，如常規的基因表達和拷貝數變異CNV實驗。TaqMan 熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團連接在探針的5'末端，而淬滅劑則在3'末端（圖2）。PCR擴增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，探針完整時，報告基團發射的熒光信號被淬滅基團吸收; PCR擴增時, Tag酶的5'-3'外切酶活性將探針酶切降解，使報告熒光基團和淬滅熒光基團分離，從而熒光監測系統可接收到熒光信號，每擴增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成,實現了熒光信號的累積與PCR產物形成完全同步。常用的熒光基團是FAM，TET，VIC，HEX。▲ 圖2 Taqman探針MGB探針對于要分辨單堿基差異的SNP實驗，采用對堿基錯配容忍度更低的MGB探針，在淬滅基團后加入了DPI3基團（圖3），從而提高了與靶標結合的親和力；而且可以對靶點堿基進行化學修飾，如PeptideNucleic Acid和Locked Nucleic Acid。▲ 圖3 MGB探針雙雜交探針Taqman探針對探針的長度有比較嚴格的要求，雙雜交探針則消除了這一“缺陷”。雙雜交探針是由兩條寡核苷酸單鏈組成，一條的3’端帶有供體熒光分子，另一條的5’端帶有受體熒光分子（圖4）。游離狀態下熒光供體會發出熒光，但當兩條單鏈都匹配到模板鏈上時，就會發生熒光共振能量轉移FRET，受體熒光分子就可以發出熒光，其熒光強度與生成的產物的量成正比。雙雜交探針的優勢有兩點：擺脫了探針長度的限制，較長的探針可以提高與模板匹配的成功率；只有上下游兩條探針都正確匹配后才能檢測到受體熒光分子發出的熒光，特異性有所提高。▲ 圖4 雙雜交探針分子信標探針游離狀態下，分子信標探針是一種莖環結構，其環狀部分的15-30個堿基可以與靶標區域相結合匹配，下端的配對區域（左右一般各5-6個堿基）則由重復的GC組成，從而將5’的熒光分子和3’的淬滅基團緊緊聚在一起，熒光發生淬滅；當退火時，分子信標探針解開環并與模板靶標雜交，這樣熒光分子和淬滅基團的物理距離就變大了，熒光淬滅的前提就打破了（圖5）。除了MGB探針，分子信標探針也非常適合用于SNP檢測。▲ 圖5 分子信標探針除了上述幾種類型的探針之外，還有嘗試將引物和探針功能相結合的技術，如Amplifluor、LUX等，在設計難度上有所提高，但使用時更簡便。各有其應用的側重點和設計上的利弊，在此不多贅述。那么在熒光定量PCR實驗中，我們應該如何進行選擇呢？在這里，給大家總結了一些兩種方法的區別，供大家參考。表1 染料法和探針法的區別
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- 2021-12-20 13:35:08人28S抗核糖體抗體試劑盒
- 人28S抗核糖體抗體試劑盒,人(28SrRNP)ELISA檢測試劑盒本生生物公司供應：ELISA試劑盒,分光光度計，血清，熒光定量PCR耗材，移液器吸嘴，微量離心管，進口凍存管，細胞培養皿，培養板，培養瓶，吸頭，儀器及手套，色譜耗材，針頭過濾器。產品名稱：人28S抗核糖體抗體(28S rRNP)ELISA試劑盒 貨號：BS-0605規格：96T/48T保存條件及有效期： 1、試劑盒保存：2-8℃。 2、有效期：6個月.人28S抗核糖體抗體試劑盒,人(28SrRNP)ELISA檢測試劑盒注：科研實驗專用。
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