為了滿足不斷增長和發展的寡核苷酸藥物管線的分析需求，公司推出了一種基于UPLC-Tof MS技術的寡核苷酸雜質分析工作流程。該方法利用ACQUITY Premier UPLC系統提供的快速分離技術，減少溶劑消耗和有毒廢物的產生，提高分離質量和分析通量；利用BioAccord系統的高分辨率質量檢測能力，顯著減少雜質鑒定的測量誤差，并改善質量差異很小的雜質的檢測。例如，序列雜質n-U和n-C的質量僅相差約1 Da，在-4電荷狀態下，它們的 m/z 值(分別是1681.046和1681.2928)非常相近，傳統單四極桿質譜方法難以區分，但高分辨質譜新方法能夠輕松分辨。

• 高效工作流程：本解決方案顯著簡化了數據分析流程，將原本耗時數小時的分析任務縮短至數分鐘，極大提升了工作效率。

• 自動化與合規性：通過waters_connect Informatics平臺，數據處理過程實現了高度自動化，并確保了合規性，有效降低了人為錯誤的風險。

• 用戶友好與可擴展性：該方法易于使用，無需復雜的專業知識或長時間的培訓，同時具備高度的可擴展性，使更多用戶能夠輕松上手并高效應用。

• 性能卓越：相較于傳統單四極桿質譜平臺，BioAccord系統或Xevo QTof MS在色譜和質譜性能方面均有所提升，為用戶提供更為準確可靠的實驗結果。

圖2.寡核苷酸靶向雜質分析工作流程步驟。

圖3.使用靶向工作流程對標準品中FLP進行已知雜質定量。表格顯示了校準曲線中包含的每次進樣的信息。校準曲線(右下角)包括趨勢線，R²表示擬合質量。

圖4. 使用UV數據(上圖)和從MS數據中提取的離子色譜圖(XIC)(下圖)分別定量色譜分離的雜質和已知的共洗脫雜質的積分結果。

圖5. 比較靶向工作流程中的嚴苛電離與溫和電離條件結果，以區分相同m/z的加合物和已知雜質。

1. 確認FLP的m/z與標準品中FLP或理論值m/z一致；

2. 確認FLP鈉離子加和峰相對強度小于FLP強度的指定閾值；

3. 通過XIC積分對與FLP共洗脫的未知雜質峰進行篩查，對比嚴苛電離條件和溫和條件的圖譜差異去除加和峰干擾；

4. 通過XIC積分定量與FLP共洗脫的未知雜質。

圖6.寡核苷酸非靶向雜質分析工作流程步驟。

圖7.寡核苷酸非靶向雜質分析工作流程對FLP進行識別測試。

圖8.使用寡核苷酸非靶向雜質分析工作流程中對不同電離條件的結果進行鏡像圖對比，以區分相同m/z的加合物和雜質峰。

寡核苷酸雜質分析工作流程數據包還包括報告模板，這些模板以清晰、簡潔的方式總結數據，能夠快速傳達整合數據和結果。針對靶向和非靶向工作流程，將分別生成單獨的報告。非靶向工作流程的示例報告頁面包含一個標題頁，顯示分析的基本信息以及對系統適用性信息的總結；其他頁面顯示了與雜質定量相關的信息，例如列出所有檢測到的雜質及其相對響應的表格；最終報告部分包含數據質量驗證的信息，如每個定量雜質的單獨提取離子色譜圖。

圖9.非靶向工作流程雜質分析設計的定制報告模板生成的例圖。

隨著合成寡核苷酸在治療領域的重要性日益凸顯，對復雜雜質譜進行快速準確分析的需求也隨之增加。公司推出的創新解決方案，通過集成UPLC-Tof MS系統和合規的UNIFI應用程序，在waters_connect平臺內實現了自動數據處理和優化的工作流程。這一方法克服了傳統HPLC-單四極桿質譜法的不足，顯著減少了手動數據分析的需求，提高了分析效率，降低了人為錯誤風險。該工作流程集成了多種分析方法，配備了現成的計算和報告模板，簡化了用戶輸入，確保了數據的清晰呈現。這一解決方案易于適應不同合成寡核苷酸產品和雜質，為下一代寡核苷酸的治療應用提供了強有力的分析工具和方法，引領了寡聚核苷酸雜質分析領域的新突破。

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