產(chǎn)品描述

天然蛋白A（Protein A）是一種發(fā)現(xiàn)于金黃色葡萄球菌的細(xì)胞壁表面蛋白，與分離自G型或C型鏈球菌屬的蛋白G類似，主要通過與免疫球蛋白（Ig）的Fc區(qū)相互作用，結(jié)合大多數(shù)哺乳動(dòng)物的IgG，可用于多種抗體（單抗和多抗）的分離純化。在與不用的免疫球蛋白亞類的結(jié)合特性上，ProteinA 和Protein G結(jié)合性能不太一樣（詳見附錄1）。

本品使用的是基因改造后的蛋白A，不僅維持其本身的Ig親和特性，同時(shí)也去除了天然蛋白本身的非主要結(jié)合域以降低非特異性結(jié)合，耐堿rProtein A Agarose Resin 以瓊脂糖凝膠為基質(zhì)，修飾的耐堿重組Protein A為配基，具有很高的物理化學(xué)穩(wěn)定性。利用本品經(jīng)過一步親和層析，即可從腹水、血清和培養(yǎng)液等樣品中得到高純度的抗體，使用方便，應(yīng)用廣泛。

翌圣為您提供蛋白純化實(shí)驗(yàn)整體解決方案，相關(guān)產(chǎn)品選購請參考：蛋白純化系列產(chǎn)品-選購指南

產(chǎn)品性質(zhì)

保存方法

2~8℃保存，有效期5年。

注意事項(xiàng)

1. 請勿冷凍保存本產(chǎn)品。
2. Protein A瓊脂糖珠使用前一定要充分顛倒若干次，使瓊脂糖珠混合均勻。
3. 所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
4. 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
5.  本產(chǎn)品僅作科研用途！

使用方法

1緩沖液的配制

建議以下緩沖液在使用前用0.22 μm或0.45 μm濾膜過濾。

平衡/結(jié)合/洗雜緩沖液：0.15 M NaCl，20 mM Na₂HPO₄，pH7.0

洗脫緩沖液：0.1 M甘氨酸，pH 3.0

中和液：1 M Tris-HCl，pH 8.5

2 樣品準(zhǔn)備

上柱之前要確保樣品溶液有合適的離子強(qiáng)度和pH值，可以用結(jié)合/洗雜緩沖液對血清樣品、腹水或細(xì)胞培養(yǎng)液稀釋，或者樣品用結(jié)合/洗雜緩沖液透析。

3 裝柱

將耐堿rProtein A Agarose Resin裝入合適的層析空柱中，注意避免產(chǎn)生氣泡。

4 樣品純化

1）平衡：用5倍柱體積的結(jié)合Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護(hù)蛋白的作用。

2）上樣：將樣品加到平衡好的rProtein A Agarose Resin中，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。

3）洗雜： 用10-15倍柱體積的洗雜Buffer進(jìn)行清洗，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液。

4）洗脫： 使用5-10倍柱體積的洗脫Buffer，收集洗脫液，即目的蛋白組分。

5）CIP清洗及保存：一般使用大于 3CV 的 0.1-0.5 M NaOH，接觸時(shí)間為 15 min；然后用 5CV 的平衡液沖洗至中性。最后再用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%的乙醇中，置于4℃保存，防止填料被細(xì)菌污染。

5 SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進(jìn)行檢測，判定其純化效果。 

附錄1. 蛋白A，G對不同物種Ig的結(jié)合能力總表