產品簡介

MBPSep Dextrin Agarose Resin 是一種純化帶有麥芽糖結合蛋白（MBP）標簽蛋白的親和層析介質，MBP可促進連接蛋白的正確折疊，增加在細菌中過量表達的融合蛋白的溶解性，尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步純化MBP融合蛋白，結合的融合蛋白可以用10 mM麥芽糖進行溫和洗脫，保護了目的蛋白的活性，MBP融合部分后續可用位點特異性蛋白酶切除。此外，MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF以高度交聯的6%瓊脂糖凝膠為基質，具有更高的物理化學特性，可以耐受更高的壓力，在相對較高的流速下，實現對目的蛋白的純化，更適于工業大規模蛋白的純化。

MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL是裝填了MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF的一種中壓預裝柱，規格1 mL，預裝柱具有標準接口，可以適配商品化的各類中壓色譜系統，如ÄKTA等，方便客戶操作。

產品信息

產品性質

儲存條件

2~8℃保存，有效期2年。

需準備試劑

所用水和Buffer在使用前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾除菌。

平衡/洗雜緩沖液：20 mM Tris-HCl, 200 mM NaCl, 1 mM EDTA, pH7.4

洗脫緩沖液：20 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, 10 mM 麥芽糖, pH7.4

【注】平衡/洗雜緩沖液或洗脫緩沖液中可加入1 mM DTT 或 10 mM β-巰基乙醇。

使用說明

【注】樣品在上樣前最好用0.22 µm或0.45 µm濾膜過濾，減少雜質以防阻塞柱子。

1. 樣品純化（以Akta為例）

1）準備：將泵管道中注滿去離子水。去掉上塞子，將層析柱連接至色譜系統中。再折斷下口，將預裝柱接到色譜系統中，并旋緊。

2）清洗：3-5倍柱體積去離子水沖洗層析柱中儲存液。

3）平衡：用5倍柱體積的平衡Buffer平衡層析柱，使填料處于與目的蛋白相同的緩沖體系下，起到保護蛋白的作用。

4）上樣：將樣品加到平衡好的層析柱中，推薦流速1 mL/min，保證目的蛋白與樹脂充分接觸，提高目的蛋白的回收率，收集流出液，待檢測。

注：樣品的粘度增加使得即使上樣體積很少，也會導致層析柱很大的反壓。上樣量不要超過柱子的結合能力。大量的樣品體積也可能造成很大的反壓，使得進樣器更難使用。

5）洗雜：用10-15倍柱體積的洗雜buffer進行清洗，直到紫外吸收達到一個穩定的基線，去除非特異性吸附的雜蛋白，收集洗雜液，待檢測。

6）洗脫：用洗脫Buffer采用一步法或線性梯度洗脫。一步洗脫中，通常5倍柱體積洗脫液足夠將目的蛋白洗脫下來。也可以用一個小的梯度，例如20倍柱體積或更多，來分離不同結合強度的蛋白質。

7）清洗與保存：依次使用3倍柱體積的平衡Buffer和5倍柱體積的去離子水平衡填料，最后用5倍柱體積的20%的乙醇平衡，然后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存，防止填料被細菌污染。

2. SDS-PAGE檢測

將純化過程中得到的樣品（包括原始樣品、流出組分、洗雜及洗脫組分等）利用SDS-PAGE進行檢測，判定其純化效果。

3.填料清洗

MBP標簽蛋白純化產品可以重復使用而無需再生，但隨著非特異結合蛋白的增多和蛋白的聚集，會造成流速和結合載量性能下降，這時可按照下面方法對填料進行清洗。

1）3倍柱體積的去離子水；

2）3倍柱體積的0.1%SDS或0.1 M NaOH溶液；

3）3倍柱體積去離子水；

4）填料清洗后保存在等體積的20%乙醇中，置于2-8℃保存。

注意事項

1. 請勿冷凍保存本產品。
2. 所有操作過程中，樣本需要在4℃或冰上操作。
3. 本產品僅作科研用途。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

附表 問題及解決方案

Ver.CN20231117