產品描述

本試劑采用獨特的裂解緩沖液體系，可以快速使細胞裂解，釋放出螢光素酶。在ATP、鎂離子和氧氣存在的條件下，釋放出的螢火蟲螢光素酶（Firefly luciferase）能夠催化螢光素（luciferin）氧化成oxyluciferin，在luciferin氧化的過程中會發出波長為560 nm左右的生物熒光，該螢光可通過化學發光儀進行測定。檢測原理如圖所示：

圖1：螢火蟲螢光素酶檢測原理圖

產品組分

運輸與保存方式

干冰運輸。-20℃保存，有效期1年。

注意事項

1）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

2）本產品僅作科研用途！

實驗步驟

1.細胞

1）將細胞裂解液充分混勻，按如下方式加入細胞裂解液，充分裂解細胞。

a: 對于貼壁細胞，吸盡細胞培養液，按照下表比例加入細胞裂解液，輕輕旋轉培養皿或者培養板使裂解液完全覆蓋細胞；

b: 對于懸浮細胞，離心棄去上清，按照下表比例加入裂解液。

2）冰上孵育5 min，充分裂解細胞。

3）用于熒光檢測或保存。

【注】：裂解產物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產物不能多次反復凍融）。

2.葉片組織（以煙草葉片為例，僅供參考）

1）取3-4片直徑為6-8 mm的處理好的煙草葉盤，放入2 mL的 EP 管（提前放入3-4個小鋼珠）中，液氮中冷凍，使用破碎儀進行研磨破碎（45 Hz，30 s）。破碎完全后在EP管中加入100 μL裂解液。

8）冰上孵育5 min左右，充分裂解葉片。

9）10000-16000 rpm離心1 min，取上清進行熒光檢測或保存。

【注】：裂解產物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產物不能多次反復凍融）。

3.原生質體（僅供參考）

1）將重懸后的原生質體離心收集至2 mL離心管中，加入100 μL左右的裂解液。

2）冰上孵育5 min左右，充分裂解原生質體。

3）用于熒光檢測或保存。

【注】：裂解產物可室溫保存6 h，4℃保存16 h，-80℃可長期存放（裂解產物不能多次反復凍融）。

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