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2025-01-10 10:50:00酵母抗體庫構建: 酵母抗體庫構建是一種利用酵母細胞作為表達系統，構建包含多種抗體基因的文庫的技術。該技術通過基因工程手段，將抗體基因導入酵母細胞，使其表達出相應的抗體。這些抗體能夠與目標分子特異性結合，用于疾病診斷、治療及科學研究等領域。酵母抗體庫構建具有高效、高通量、成本低等優點，能夠快速篩選出具有高親和力和特異性的抗體，為抗體藥物研發和疾病治療提供有力支持。

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從酵母展示到抗體優化：全面了解抗體酵母展示服務技術

本文將探討酵母表面展示技術的原理、酵母抗體庫構建和篩選技術的實際應用，并展望其未來的發展方向。

泰克生物科技（天津）有限公司 33
2024-10-11
酵母表面展示技術酵母展示抗體篩選技術酵母抗體庫構建

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酵母抗體庫構建問答

2023-12-25 17:14:18重組抗體的類型有哪些？: 重組抗體，也被稱為重組免疫球蛋白，是通過基因工程技術將抗體的基因在合適的宿主細胞中表達并生產出來的一類抗體。與傳統的多克隆抗體和單克隆抗體相比，重組抗體具有更高的特異性和親和力，并且可以針對特定的抗原表位進行設計和優化。重組抗體的類型包括嵌合抗體、雙特異性抗體、抗體片段和Fc融合蛋白等。下面一起來看一下他們各種的應用：https://cn.sinobiological.com/resource/antibody-technical/recombinant-antibody-overview①嵌合抗體1975年，雜交瘤技術的發現徹底改變了抗體研究和臨床開發。然而，鼠源性抗體的療-效受到人抗鼠抗體（HAMA）效應的限制，鼠源性單抗對人體具有異種蛋白的免疫原性 ,在人體內半衰期較短。1984年，研究人員通過基因工程構建了第一個嵌合抗體，也是公認的第一種重組抗體，以降低鼠源抗體在人體內的免疫原性。其中，約30%-35%的分子來源于小鼠的抗體序列，約65%-70%來源于人的抗體序列。所得嵌合抗體保留了親代小鼠抗體的抗原結合能力。抗體嵌合是開發治-療性人源化抗體的第一步。義翹神州采用CDR移植技術和計算機輔助分子建模，提供高質量的單克隆抗體人源化服務，成功率高，人源化程度>90%。②抗體片段每一個完整的免疫球蛋白（IgG）分子包含通過二硫鍵連接的兩條重鏈和兩條輕鏈。抗體片段（如Fab、scFv和VHH）體積小，比其全長抗體具有更好的組織或腫瘤穿透力。因此，它們在免疫治-療方面具有巨大的前景，尤其是在實體瘤方面。此外，它們的半衰期也較短，可用作放射性顯像劑。然而，由于缺乏Fc區，它們不能引起Fc介導的抗體效應功能，如抗體依賴性細胞毒性（ADCC）和補體依賴性細胞毒性（CDC）。起初采用酶解法對IgG抗體進行片段化。胃蛋白酶作用于鉸鏈區二硫鍵所連接的兩條重鏈的近C端，水解產生被稱為F(ab’)2的二價Fab片段。然后，通過木瓜蛋白酶將該片段裂解為兩個相同的Fab片段。然而，酶解法限制了可制備的抗體片段類型，而且不適合工業化大規模生產和純化。隨著抗體工程技術的進步，這些問題可以通過重組生產抗體片段來解決。抗體基因克隆測序成功后，可通過瞬時轉染在原核表達系統（如大腸桿菌）和哺乳動物系統（HEK293細胞）中表達抗體片段。憑借豐富的重組生產經驗，義翹神州建立了高通量VHH表達平臺，交付了多個VHH抗體生產項目，總體成功率超過90%。除了常見的VHH形式，我們還可以表達雙特異和多特異VHH。此外，義翹神州還可以表達其他各種高特異性和親和力的抗體片段，如scFv和Fab。③雙特異性抗體與常規單克隆抗體不同，雙特異性抗體（bsAb）具有兩個結合位點，可識別同一抗原上兩個不同抗原或表位。由于這一特性，雙特異性抗體備受研究者和制藥業的關注。截止目前，美國食品藥品監督管理局（FDA）已批準了4種雙抗藥物，而且160多種雙抗正在進行臨床試驗，用于治-療癌癥、糖尿病、阿爾茨海默病和其他疾病。起初，雙特異性抗體通過四源雜交瘤技術制備，但這對下游抗體生產和純化構成了巨大的挑戰。隨著過去20年重組DNA技術的發展，出現了幾種雙特異性抗體形式，以適應所需的靶標-產品特征。為了解決重鏈錯配問題，Genentech首先提出了“knob-into-hole”（KiH）技術，該技術通過對CH3結構域進行改造，在每條重鏈中創建一個“knob”或一個“hole”，以誘導異源二聚化。同樣地，研究人員也采用了common light chain 和CrossMab等其他技術來解決輕鏈錯配問題。表達雙特異性抗體主要在哺乳動物細胞中進行。由于單克隆抗體和雙特異性抗體之間的各種結構相似性，許多已建立的常規單抗純化工藝也可適用于雙特異性抗體。（參見另一篇文章：“雙特異性抗體：抗體治-療中的新星”）④Fc融合蛋白Fc融合蛋白（又稱Fc嵌合融合蛋白、Fc-Ig和Fc標簽蛋白）是一種同源二聚體，由免疫球蛋白的Fc段與具有生物學活性的蛋白分子組成。雖然單克隆抗體是治-療性生物制劑開發的重-點，但Fc融合蛋白也是一類成功的生物制藥產品，至少有13種藥物獲得了歐洲藥品管理局（EMA）和美國FDA的批準。除治-療應用外，Fc融合蛋白還是基礎研究中的檢測試劑，包括流式細胞術、免疫組織化學和蛋白結合試驗。事實上，與Fc區的連接可以提高一些結合蛋白的溶解度和穩定性。鑒于其大小和對糖基化的需求（大多數是糖蛋白），Fc融合蛋白主要在哺乳動物表達系統中產生。目前，抗體工程技術取得了一定的進步，這極大地促進了各種形式重組抗體的開發，用于疾病治-療。FDA已批準了100多種抗體藥物，目前有多種抗體處于臨床后期開發階段。此外，重組抗體還可用于許多研究應用：蛋白免疫印跡（WB）、免疫組織化學（IHC）、免疫熒光（IF）、流式細胞術（FC）和表面等離子體共振（SPR）。總之，重組抗體是基因工程技術的重要應用之一，其類型多樣，具有廣泛的應用前景。隨著基因工程技術的發展，重組抗體的生產成本和安全性問題也將得到進一步優化，為臨床治-療和科學研究提供更多有效的工具。同時，我們也應該認識到重組抗體的潛在風險和挑戰，加強對其安全性和有效性的評估和監管，以確保其能夠更好地服務于人類的健康事業。更多重組抗體詳情關注：https://cn.sinobiological.com/news/recombinant-antibodies-formats

2023-06-25 12:12:24生物樣本庫建庫難？上云學院“粽”享知識&好禮

2023-06-16 14:28:25構建表達載體想降本增效？看這一篇就夠了: 想要開發有穩定生產能力的細胞株，除了在細胞開發中對于細胞表達能力的評估篩選以外，前期的表達載體的構建過程也非常重要。使用納升移液技術可以顯著提高細胞株過程基因合成，表達載體構建以及轉染篩選等實驗的實驗效率，降低實驗成本。聲波移液展示Echo?移液系統依靠專利技術（U.S. Patent 6938995）和創新方法改變移液操作在整個生命科學領域中的應用。它采用動態液體分析（Dynamic Fluid Analysis?, DFA）技術和聲波移液（Acoustic Droplet Ejection，ADE）技術，讓研究人員能夠移取多種不同類型的液體，完成微量小體積（2.5/25nL）的移液工作。全流程無需槍頭耗材，無交叉風險。納升移液技術讓細胞株構建更快、更準、更經濟更快—— Echo快速任意孔到任意孔移液，極速基因組裝在質粒構建前期，需要非常多的準備實驗，如基因組裝中將不同的DNA片段混合，在檢測反應中將不同的樣本組合，在NGS文庫構建過程中將多個文庫pooling到一起，在CRISPr基因編輯中構建sgRNA文庫等等，這些實驗都需要進行快速、靈活的加樣移液，就算使用高通量的移液工作站，往往也要好幾小時才能完成。納升移液技術Echo的任意孔到任意孔的快速移液特點則讓此類應用簡單、快速化，每次轉移花費更少時間更短。這為基因組裝節省了高達82%的時間。從母板任意孔轉移任意體積樣品到目標板任意孔中，實現快速挑選、樣品混合和組合。有效縮短實驗周期更準—— Echo加樣精準，提高克隆效率利用質粒上含有的抗性選擇進行篩選，需要對篩選結果進行鑒定，而qPCR也是常用的鑒定方法之一。使用Echo納升移液技術進行微量化克隆篩選鑒定，可以以更少的實際成本精準完成實驗。使用Echo完成 qPCR的反應體系構建，通過減少每個組件的體積，并使用不使用tips的Echo，將反應體積縮小10倍，從10 μL減少到1 μL，成本降低了8倍。精準減小實驗體積更經濟—— Echo微量化，縮小反應體系，讓新技術更經濟系統化的設計必然會帶來更大的樣本量，從而導致更高的費用， Echo采用聲波的能量進行無接觸式移液，且每滴液滴僅為2.5nL或25nL，因此可以直接省去吸頭耗材的消耗，也可以將檢測反應體系降低4-100倍，使成本急劇下降。有效縮減試劑成本Gibson and Golden Gate Assembly實驗：不同反應體積的成本效益和組裝效率比較產品信息“僅用于科研，不用于臨床診斷”

2024-01-16 16:35:20免疫組化抗體（IHC）的實踐應用與常見問題詳解: 免疫組化法（IHC）是使用抗體檢測組織切片（例如肝臟、胰-腺或心臟）中細胞蛋白質（抗原）的過程。當組織樣本被送到實驗室進行疾病檢查時，有幾個細節不易確定。幾種疾病或疾病亞型在顯微鏡下可能看起來相似或看起來具有相似大小的細胞，但具有不同的行為和必要的治-療，區分它們的最佳方法是檢測這些細胞上作為標記的特定分子。免疫組化法（IHC）是一種使用抗體（匹配分子）的技術，用于尋找、識別附著在細胞上的標記物。在顯微鏡下可以看到抗體本身，這有助于技術人員進行精確識別。免疫組化法（IHC）已廣泛應用于醫學中，特別是癌癥診斷。淋巴瘤是依賴于IHC進行正確診斷和治-療決策的癌癥之一。免疫組化常見問題：問題一：我應該使用PIER還是HIER進行抗原修復？固定過程可能會掩蓋抗原，導致抗體結合無法進行。這種掩蓋可以通過一種稱為抗原修復/抗原去掩蔽的技術來逆轉，該技術可以通過加熱（HIER；熱誘導抗原修復）或蛋白酶（PIER；蛋白水解誘導抗原修復）介導。后者使用蛋白酶K、胰蛋白酶和胃蛋白酶等酶。PIER方法通過降解掩蓋表位的肽而起作用。然而，PIER也可能導致樣品形態或抗原本身的改變。因此，PIER的使用頻率低于HIER，后者通過恢復表位的二級和三級結構而起作用。為了確定是否應該進行抗原修復以及采用哪種方法，應遵循以下指南：進行文獻檢索，以確定其他研究人員如何可視化您感興趣的抗原。檢查抗體供應商是否推薦了特定的抗原修復-方案。如果沒有特定的協議可用，我們建議使用HIER而不是PIER協議。對于HIER，總是使用中性抗原修復緩沖液，并與未進行抗原修復的樣品進行比較。如果中性染色溶液沒有產生良好的染色效果，則應測試堿性或酸性抗原修復緩沖液。除了pH值外，其他需要優化的參數是溫度和持續時間。理想情況下，嘗試各種pH值、溫度和時間組合。為了排除由HIER過程引起的偽影，始終包括一個控制樣品，該樣品在沒有HIER步驟的情況下進行染色。問題二：如何選擇IHC實驗的抗體，單克隆抗體還是多克隆抗體？單克隆抗體和多克隆抗體的抗體特性決定了其優缺點。單克隆抗體是針對單個表位的同種免疫球蛋白。抗體是由一個動物的單個B細胞克隆產生的，因此在免疫化學上相似。多克隆抗體是針對同一抗原的各種表位的異質抗體混合物。抗體是由動物的不同B細胞克隆產生的，因此在免疫化學上不同。多克隆混合物中的抗體可能具有略微不同的特異性和親和力。如果蛋白質靶標具有相同的氨基酸序列，單克隆抗體更合適。一旦抗原因各種原因發生構象變化，如蛋白質相互作用、翻譯后修飾、溫度、pH值、固定、鹽濃度等，單克隆抗體和抗原的聯合作用將受到嚴重影響。由于多克隆抗體具有多個表位，不受蛋白質構象變化的影響，一般來說，在一定范圍內的pH和鹽濃度內，多克隆抗體之間的抗原結合比單克隆抗體更穩定。問題三：一抗的孵育時間多久？一抗的孵育時間與溫度,抗體濃度有關。一般情況下,在37℃的條件下,孵育1-2小時左右。在室溫的條件下,孵育3小時左右。在4℃的條件下,孵育18-24小時左右。義翹神州提供石蠟切片免疫組化（IHC）檢測服務，更多免疫組化的問題可以上義翹神州網咨詢！https://cn.sinobiological.com/services/immunohistochemistry-service

2023-02-15 19:15:40揭秘 | NGeniuS，如何一鍵運行NGS自動化建庫: 你的自動化NGS文庫構建真的全自動簡單易用嗎？高通量測序技術廣泛應用到產前診斷、腫瘤臨床診斷、遺傳學疾病檢測、藥物基因組學檢測等各個領域。其中濕實驗NGS建庫因為流程復雜、步驟繁瑣、耗時長等因素，自動化移液工作站代替人工已經被測序行業廣泛采用。搭建成熟穩定的自動化建庫平臺需要經過編輯、測試、優化，方能投入使用，還可能面臨處理樣本數量不夠靈活和以8為倍數制樣的試劑浪費，有時還伴有手工半自動操作，需要培養熟練的設備管理人員等問題。貝克曼庫爾特生命科學特推出的Biomek NGeniuS全自動文庫制備系統，具備簡單易用的防錯設置、無人值守的自動化處理、以全新的方式開啟“一鍵式自動化”NGS。今天小貝將為你揭秘Biomek NGeniuS是如何實踐極簡主義，用一個按鈕進行自動化建庫。圖1. Biomek NGeniuS 全自動文庫制備系統一鍵開啟NGS自動化建庫Step.1免編應用程序輕松設置方法在Biomek NGeniuS Portal，支持您從NGeniuS電子應用程序庫中直接選擇需要使用的方法，無需方法編輯調試優化。您可以輸入今日運行的批次名稱、樣本數量，靈活地調整建庫投入量， PCR循環數，磁珠晾干時間等細節參數，并選擇建庫實驗的安全起始點。Step. 2工作輔助材料幫助試劑準備完成實驗設置后，可下載打印工作輔助表，根據表單提示準備所需試劑。Step.3 撥動導航轉盤一鍵運行你的實驗Biomek NGeniuS主機的實驗運行僅需控制一個唯一的導航轉盤。實驗批次的信息和選擇菜單將顯示在背部的24英寸平視顯示界面中，視圖清晰簡潔，內容一目了然。圖2. Biomek NGeniuS導航轉盤與平視顯示界面首先，平視顯示器所示的信息將指引您完成建庫實驗的試劑、耗材擺放。Dynamic DeckOptix光學分析技術將自動實時識別耗材種類與擺放位置是否正確，避免耗材擺放錯誤的發生。OCR（光學字符識別技術識別）技術，則幫助識別試劑盒標簽，判斷試劑使用是否正確。隨即Biomek NGeniuS通過液面探測技術，自動判斷試劑管內試劑量是否足夠并進行試劑分裝。分裝完成的試劑盒可收回冰箱存儲。NGeniuS即可開始建庫實驗，平視顯示器將同步顯示建庫完成時間。配合內置熱循環儀，機械手搬運系統以及溫控模塊，NGeniuS 支持全流程無人值守。您可以通過Biomek NGeniuS Portal軟件遠程實時查看，隨時隨地掌握實驗動態，合理安排實驗室工作進度。不斷豐富的應用程序庫Biomek NGeniuS不需要進行建庫試劑盒方法的編輯，直接從應用程序庫里面下載開發完成的應用程序即可使用。同時，貝克曼庫爾特生命科學旨在不斷豐富應用程序，相繼與IDT, Illumina, AmoyDx，Pillar Biosciences等基因測序和分析解決方案公司簽訂應用開發協議，在 Biomek NGeniuS全自動文庫制備系統上開發應用程序，持續擴展電子應用程序庫列表，滿足科研端及臨床轉化不斷迭代變化的試劑盒方法需求。