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2025-01-10 10:50:20平場復消色差物鏡
平場復消色差物鏡是一種高性能的顯微鏡物鏡。它采用復消色差設計,能夠顯著減少色差和像差,提供高清晰度的圖像。同時,該物鏡具有平場特性,可確保整個視野內的圖像保持平整度。這些特點使其適用于高精度成像需求,廣泛應用于生物學、材料科學等領域的研究。

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2025-05-08 14:30:20共聚焦顯微鏡怎么看明場
共聚焦顯微鏡怎么看明場 共聚焦顯微鏡是一種高精度的光學顯微鏡,廣泛應用于生物學、醫學和材料科學等領域,其優越的成像能力使得研究人員可以獲取更為清晰的細胞和組織結構圖像。在使用共聚焦顯微鏡時,除了可以獲得熒光成像外,還能通過適當的調節,獲取明場圖像。明場成像是一種常見的顯微技術,通過這種方式,觀察者可以看到樣本的整體形態、結構以及細節。本篇文章將詳細探討如何利用共聚焦顯微鏡獲取高質量的明場圖像,并介紹一些優化技巧,幫助研究人員在顯微成像中獲得佳效果。 明場圖像的獲取需要對顯微鏡的光源、濾光片以及顯微鏡的成像模式進行合理配置。在共聚焦顯微鏡中,光源的選擇至關重要。為了獲取明場圖像,通常需要使用白光或者透射光源。這與熒光成像的激發光源不同,熒光光源的選擇通常是根據目標分子或染料的特性來決定。明場成像模式下,通過調節光源的亮度和焦距,可以得到較為清晰的樣本圖像。 使用共聚焦顯微鏡觀察明場圖像時,需要注意光學系統的校準。共聚焦顯微鏡的核心特點是其能夠通過點掃描的方式逐點采集圖像,這使得它能夠消除焦外光,從而獲得更為清晰的圖像。在明場成像模式下,系統仍然需要進行適當的焦距調整,確保所有的圖像點都處于佳焦距范圍內。這樣可以有效避免因焦距不一致導致的圖像模糊,從而保證圖像質量的高標準。 值得注意的是,共聚焦顯微鏡的光學系統和計算機控制系統需要協調配合,才能精確控制樣本的掃描過程。在掃描過程中,樣本會被逐步掃描,每次掃描時系統都會計算樣本在該位置的亮度和反射率。明場圖像的質量不僅取決于樣本本身,還與光源的設置、掃描的精度以及數據的處理有關。因此,正確的操作流程和系統設置至關重要。 要想在共聚焦顯微鏡下獲得清晰的明場圖像,除了正確的儀器配置外,還需要掌握合理的操作技巧和成像模式設置。通過精確調節光源、優化光學系統,并配合計算機圖像處理技術,研究人員可以輕松獲得理想的明場圖像,進而為生物學研究和材料科學研究提供重要的數據支持。在實際應用中,研究人員應根據樣本的不同需求,選擇合適的成像技術,以確保圖像的精確度和可操作性。
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2023-06-25 11:49:58課堂 | 目鏡、物鏡和光學畸變
對于大多數顯微鏡應用,通常只有兩套光學器件需要由用戶調整,即物鏡和目鏡。當然,這是假設顯微鏡已經校正了科勒照明,即調整了聚光鏡和光闌。本文首先介紹了目鏡組件以及如何正確調整它們以適應你的眼睛。其次是物鏡,我們將探討光學畸變和四種最常見的物鏡,這些物鏡均經過校正以克服這些異常現象。在制造商的設計中,顯微鏡的目鏡和物鏡是一個組合,并在光學上相互補充。如果你出于任何原因更換顯微鏡之間的目鏡或物鏡,那么應該記住這一點。為獲得最 佳的樣本圖像,顯微鏡的物鏡和目鏡必須是一個和諧的工作組合。購買完整的顯微鏡時,光學部件相互匹配,為用戶提供最 佳的觀察條件。如果你在組裝一個定制的研究級顯微鏡,那么選擇的物鏡將決定適合的目鏡,反之亦然。目 鏡   目鏡是我們觀察最 終樣本圖像的光學鏡片(見圖1)。這些光學器件有時被稱為“接目鏡”或“目鏡”。放大率除了取決于物鏡的選擇,還要考慮目鏡,它的放大率通常是10的倍數。目鏡是顯微鏡的一個看似簡單的光學部件。一些基礎款目鏡確實是由一個頂部和底部安裝鏡片的金屬管組成但許多研究級目鏡由多組相互配合的鏡片組成,它提供樣本的校正視圖,并補充物鏡的特性。無論目鏡的組件設計如何,金屬外殼的兩端只有兩個用戶可以看到的鏡片。觀察最 終圖像的鏡片(最接近眼睛)被稱為“目鏡”,另一端的鏡片(朝向顯微鏡主體)被稱為“場鏡”。圖1:顯微鏡的最 終圖像可以用目鏡觀察,也叫接目鏡。你通常會在目鏡周圍發現橡膠或塑料眼罩(見圖2)。這些眼罩有多種功能。它們會阻擋一些環境光線,讓觀察者可以更清楚地看到感興趣的樣本。此外,它們還將用戶限制在與目鏡的最 佳距離內。如果您佩戴眼鏡,可以簡單地將它們卷到目鏡的頂部,或者摘掉眼鏡。關于顯微鏡衛生需注意的一點:如果你在共享的實驗室或設施中使用顯微鏡,衛生和清潔都是重要的因素。一個重要的考慮因素是眼部感染。如果你不幸有眼部感染,則應避免使用共享顯微鏡,直到感染癥狀完全消失。眼部感染可能具有高傳染性,很容易傳播給其他顯微鏡使用者。無論您的眼睛是否健康,您都應該將目鏡和眼罩(以及整個顯微鏡)保持在清潔狀態,以便于下一個用戶的使用。目鏡屈光度的調整  顯微鏡用戶需要調整目鏡適應自己的視力。這被稱為“屈光度調節”,用于糾正眼睛之間的焦點和視覺差異(見圖2)。除非您有完 美的正常視力(也稱為“20/20視力”),否則為更清晰地觀察樣本,您需要完成這一簡單的調整。在調整屈光度之前,首先應調整目鏡之間的距離(假設您使用的是雙目顯微鏡)以適應使用者的生理結構。雙目目鏡安裝在一個水平的“滑塊”上,兩個目鏡可以活動以適應眼睛之間的距離。或者,每個目鏡都安裝在獨立的外殼中,能夠以半圓形的旋轉方式移動,配合使用者眼睛之間的距離。設置好物理距離后,就可以調節屈光度。檢查每一個目鏡時,您會注意到至少有一個目鏡的金屬體或外殼周圍有一個滾花環(另一個也可以是固定焦點目鏡)。僅通過固定目鏡向下看,并使用顯微鏡的主調焦輪讓樣本進入清晰的焦點。閉合固定焦距目鏡上的眼睛,僅使用可調節光圈的目鏡來觀察樣本。保持樣本的原始焦點的同時,慢慢轉動屈光度環,直到樣本進入清晰的焦點。當你睜開雙眼時,樣本現在應該處于清晰的焦點。調整屈光度厚,每個所選物鏡的設置都是一樣的。圖2:大多數目鏡都有可移動或可彎曲的眼罩,用于阻擋一些環境光線。此外,它們還可以將用戶限制在與目鏡的最 佳距離內。佩戴眼鏡的用戶應該摘下眼罩。借助屈光度調節,可以根據用戶的屈光度對目鏡進行個性化設置。光學畸變  顯微鏡(以及在本文的范圍內)有兩種主要類型的光學畸變:色差和幾何像差。幾何像差(也被稱為“單色差“或“球面像差”)也被稱為“塞德爾像差”。菲利普·路德維希·馮·塞德爾(Philipp Ludwig von Seidel)(1821-1896)是一位德國數學家,他在1857年確定了五種幾何像差(球差、慧差、像散、場曲和畸變)。一般來說,幾何/單色/賽德爾像差是由于鏡片的結構和幾何形狀,以及光在通過鏡片時的折射和反射方式而產生。考慮到所有可能通過曲面鏡片的光波,通過鏡片中心的光波將比通過曲面鏡片邊緣的光波的折射率低。通過鏡面之前平行的光波不會匯聚到一個焦點上,而是作為不同的點沿光軸傳播(圖3)。圖3:球面像差描述了這樣一個事實:通過鏡片中心的光波比通過曲面鏡片邊緣的光波的折射率要小。因此,在通過透鏡之前是平行的光波不會匯聚到一個焦點上。色差主要是由于鏡片的材料而發生的。白光是由許多不同的波長/顏色組成的,當它通過凸透鏡時,它被分割成不同的組成部分。波長的分裂意味著,一旦光線通過透鏡,各組成顏色就不會彼此聚焦在同一個匯聚點上(圖4)。 圖4:通過凸透鏡的白光被分割成不同的波長,并在不同程度上被折射。因此,它們不會匯聚在同一個焦點上。這種現象被稱為色差。物 鏡圖5:一個帶有校正環的甘油浸泡物鏡。顯微鏡物鏡的制造和校正是為了在每個光學部件中考慮一個或多個這樣的像差。在物鏡外殼上蝕刻的信息中(除了放大率、物鏡類型、數值孔徑(NA)等),還包括有關光學校正的信息(見圖3)。盡管有許多可用的光學校正,但本文將探討可能遇到和使用的四種最常見的光學校正。除了目鏡之外,物鏡看起來也很簡單。物鏡兩端的兩個透鏡被稱為“前透鏡”(離樣本最近)和“后透鏡”。后透鏡在使用過程中不可見,因為它面向顯微鏡的主體。大多數物鏡由一系列相對復雜的鏡片組成,鏡片相互補充,糾正其他扭曲的光學像差。消色差物鏡  最常見的校正顯微鏡物鏡是“消色差”物鏡。這種物鏡的鏡筒上有縮寫“Achro”或“Achromat”。這些物鏡校正“軸向色差”。當白光通過凸透鏡時,會發生這種像差。因此,白光被分割成紅、綠和藍色波長。這種分裂意味著這些波長不會匯聚到光軸上的同一個焦點上(見圖4)。如果使用沒有校正軸向色差的物鏡觀察樣本,那么樣本周圍會出現彩色條紋和圖像的模糊。非色差物鏡只校正了兩個波長(紅色和藍色),使其與綠色波長的焦點大致相同。此外,消色差物鏡的球面像差也只針對一種顏色進行了校正。平場消色差物鏡  更高一級的校正是在“平場消色差”物鏡中發現的。這些通常由物鏡筒上的縮寫“平場消色差”或“Achroplan”來識別。除了校正軸向色差外,這些物鏡還校正一種被稱為“場曲率”的光學現象。當光線通過曲面鏡片時,便會發生這種現象。投射的圖像導致樣本的視圖發生彎曲。如果使用未校正視場曲率的物鏡觀察樣本,會導致整個視場的焦點不均勻。視場的邊緣或中心可能被聚焦,但不是同時聚焦。雖然這不會影響樣本的日常觀察和檢查,但如果你想拍攝用于發表的圖像,就會有問題。在這種情況下,建議使用平場消色差物鏡校正平場,實現整個圖像視圖的均勻聚焦。半復消色差物鏡  再高一級的校正物鏡是“半復消色差”或“螢石”物鏡。這些物鏡由物鏡筒上的縮寫“Fluar”、“Fluor”、“Fluo”或“Fl”來識別。術語“螢石”可以追溯到一個時期,當時這種鏡片是由螢石制造的,它是一種氟化鈣礦物。在商業上,這種礦物也被稱為“螢石”,并且仍然被用于制造一些半復消色差鏡片,盡管現在大多數都是由合成材料制成的。半復消色差物鏡對一種或兩種組成色進行校正,確保不同的光波集中在一起,成為光軸上所謂的“最小混淆圈”。除了上述外觀上的縮寫外,還有一些帶有“Plan FL”或“Plan Fluor”名稱的物鏡。這些物鏡不僅校正了球差和色差,而且還校正了視場曲率。復消色差物鏡  最 高級別的校正物鏡(反映在這些光學器件的成本上)是“復消色差”物鏡。這些物鏡在鏡筒上有“Plan Apochromat”、“PL APO”或“Plan Apo”的縮寫(見表1)。這些物鏡對場曲率進行了校正(因此縮寫名稱中的“Plan”),并對紅、綠和藍色波長進行了色度校正。此外,復消色差物鏡還對三個波長進行了球面校正。在復消色差透鏡中的高水平校正,相比校正較少的物鏡,在同等放大率下,可產生更高的NA。徠卡的校正物鏡關于徠卡不同類別校正物鏡的概述,可以通過以下鏈接找到(見表1)。此外,通過填寫頁面上的在線表格,徠卡可以幫助您找到您的應用所需的合適物鏡。表1:國際標準化組織(ISO)區分了三組物鏡類別,它們在色度校正的質量上有所不同。消色差、半復消色差和復消色差。徠卡的命名法進一步區分了這些組別,例如,它們的場平度、透射率等。徠卡物鏡上使用的進一步的縮寫。表2:特別適用于特定對比法的物鏡都有相應的標記。表3:必須與某一物鏡一起使用的浸泡介質在物鏡上標明。表4:徠卡物鏡上提到的更多標簽。
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2025-03-17 12:00:12溫場測溫記錄儀說明書怎么看?
溫場測溫記錄儀說明書 溫場測溫記錄儀是一種廣泛應用于工業、科研、醫療等領域的溫度監控工具。它通過多點溫度采集技術,將不同位置的溫度信息記錄并存儲,以供后期分析和管理。溫場測溫記錄儀的高精度和可靠性,使得它在環境監控、設備維護、質量檢測等方面發揮了重要作用。本文將詳細介紹溫場測溫記錄儀的基本功能、使用方法以及其在各個行業中的應用,幫助用戶更好地理解和使用此設備。 溫場測溫記錄儀的主要功能包括溫度監測、數據記錄和報警提示。該設備可以同時連接多個溫度傳感器,實時獲取多個測量點的數據,并將其地記錄到內存中。這些數據可以通過無線或有線方式導出,便于后續分析。溫場測溫記錄儀還具備報警功能,一旦測得的溫度超出設定范圍,設備會自動發出警報提醒操作人員進行調整或檢查,確保操作環境的安全性和穩定性。 溫場測溫記錄儀的使用方法相對簡單,但為了確保測量結果的準確性,用戶在使用時需要遵循一些基本的操作步驟。選擇適合的傳感器,并將其安裝在需要測量的區域,確保傳感器能夠準確采集到溫度信息。連接記錄儀與傳感器,并設置相關參數,如溫度范圍、采樣頻率等。啟動車輛開始記錄,并定期查看記錄儀的數據顯示,確保其正常運行。 在不同領域中,溫場測溫記錄儀的應用場景也各有不同。在工業生產中,溫場測溫記錄儀被廣泛應用于生產設備的溫度監控,如高溫爐、空調設備、冷卻系統等。通過實時監測設備溫度變化,及時發現異常情況,預防設備故障,延長設備使用壽命。在食品加工行業,溫場測溫記錄儀可以幫助生產線的溫度控制,確保食品的加工環境符合安全衛生標準。在實驗室和科研機構中,溫場測溫記錄儀的度對實驗數據的可靠性起到了關鍵作用,特別是在對溫度要求較為嚴格的實驗過程中,使用此設備能夠提高實驗的準確性和穩定性。 溫場測溫記錄儀的市場前景廣闊,隨著技術的發展,溫場測溫記錄儀的功能也日趨完善。例如,現代的溫場測溫記錄儀已經具備了遠程監控和智能分析功能,能夠通過網絡將溫度數據實時傳輸到云端,便于用戶在任何地方隨時查看和分析數據。這種便捷的功能,進一步提升了溫場測溫記錄儀的應用范圍。 溫場測溫記錄儀以其精確的測溫技術、可靠的數據記錄功能以及廣泛的應用場景,成為了眾多行業中不可或缺的工具。在使用過程中,操作人員應嚴格按照說明書的要求進行操作,以確保設備的高效和準確運行。隨著技術的不斷更新,溫場測溫記錄儀將在更多領域中發揮其獨特的優勢,成為推動行業發展的重要工具。
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2023-03-27 23:49:14低場磁共振和高場磁共振有什么區別
低場磁共振和高場磁共振有什么區別磁共振分析應用方面:低場核磁主要用于測試分子與分子之間的動力學信息,過弛豫時間得到分子運動信息,分子與分子之間的作用信息;研究領域屬亞微觀領域(分子之間),可測定玻璃態轉化溫度、高分子材料交聯密度、造影劑弛豫率、孔徑分布及孔隙度等,廣泛應用于食品工業、石油工業、醫藥工業、紡織工業、聚合物工業。低場核磁使用永磁體,設備小型化,靈活易于移動,也不需要特別維護,易與其他設備或配件整合,滿足在線高通量測試要求。低場核磁共振儀器費用低,儀器內部已做屏蔽,安裝場地不需特殊處理。高場核磁具有高靈敏度、高分辨率、高信噪比,但是對樣品均勻度要求高,液體需要去離子化,固體需要是粉末狀,而且儀器費用昂貴,安裝需要專用場地,需要屏蔽設施,儀器需要液氮或液氦冷卻,后續維護成本非常高;磁共振成像應用方面:低場磁共振一般指磁場強度小于0.5T的成像系統。由于磁場強度較小,低場磁共振成像儀器的價格始終,應用也非常廣泛,可用于各類疾病模型的成像研究,如腫瘤、脊柱疾病、關節炎、肌肉創傷等。相比于高場磁共振,低場磁共振成本較低,設備易于維護,適用于各大行業。高場磁共振一般指磁場強度大于1.5T的成像系統。由于磁場強度較高,高場磁共振成像信噪比高,可以提供更廣泛和更詳細的解剖學和生理學信息。高場磁共振成像適用于診斷各種疾病,如神經系統疾病、心血管疾病、腫瘤等,并且在醫學領域廣泛應用。然而,高場磁共振成本較高,設備維護和管理的難度也相對較高。
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2024-01-15 17:30:19包涵體蛋白復體常見十大問題解析
在生命科學領域中,包涵體復體的研究占據了重要的地位。但隨著研究的深入,一些問題逐漸浮現。本文將對包涵體復體研究中常見的挑戰進行解析,以及為研究者提供一些解決思路。  ①包涵體復性原則:低濃度,平緩梯度,低溫。 ②怎樣洗滌包涵體?通常的洗滌方法一般是洗不干凈的,可以先把包涵體用6M鹽酸胍溶解充分,過濾除去未溶解的物質,注意留樣跑電泳,然后用水稀釋到4M,離心把沉淀和上清分別跑電泳,如此類推可以一直稀釋到合適的濃度,可以找到一個合適去除雜質的辦法,其實這就是梯度沉淀的方法,比通常的直接洗脫效果好。 ③對于尿素和鹽酸胍該怎么選擇尿素和鹽酸胍屬中強度變性劑,易經透析和超濾除去。它們對包涵體氫鍵有較強的可逆性變性作用,所需濃度尿素8-10M,鹽酸胍6-8M。尿素溶解包涵體較鹽酸胍慢而弱,溶解度為70-90%,尿素在作用時間較長或溫度較高時會裂解形成氰酸鹽,對重組蛋白質的氨基進行共價修飾,但用尿素溶解具有不電離,呈中性,成本低,蛋白質復性后除去不會造成大量蛋白質沉淀以及溶解的包涵體可選用多種色譜法純化等優點,故目前已被廣泛采用。 鹽酸胍溶解能力達95%以上,且溶解作用快而不造成重組蛋白質的共價修飾。但它也有成本高、在酸性條件下易產生沉淀、復性后除去可能造成大量蛋白質沉淀和對蛋白質離子交換色譜有干擾等缺點。 ④8M尿素溶解的包涵體溶液應如何保存?在4度放置半個月,都沒什么問題 。在室溫放置超過48小時,可能會對目的蛋白有影響,因為尿素在堿性條件下可使一些氨基酸酰基化,所以早些處理BI溶液比較好。 ⑤復性時的蛋白濃度一般使用濃度為0.1-1.0mg/ml,太高的濃度容易形成聚體沉淀,太低的濃度不經濟,而且很多蛋白在低濃度時不穩定,很容易變性。 ⑥蛋白復性后濃度低蛋白可能是在復性的過程中發生降解了。 可以將復性好的蛋白濃縮一下泡膠看看。復性過程一般都是低濃度蛋白,需要保證分子間有足夠的折疊空間。一些未正確折疊的蛋白就存在于沉淀中,可能沉淀看不出來,復性后的蛋白高速離心看看。 ⑦復性中蛋白析出是怎么回事?該怎么處理?出現蛋白析出,肯定是條件變化太劇烈了。 復性應該采取復性液濃度和PH值逐漸變化的方法,例如根據包涵體的溶液成分,每隔1個PH或濃度值配置一種溶液,逐步透析到正常。此外透析時必須濃度極低,條件溫和,使蛋白質能夠正確折疊。但是復性的比率應該很低。 若加變性劑尿素可加到2M,鹽酸胍可加到1-1.5M; 另外可將甘油濃度增加,范圍可在≤30%,且在復性樣品中也可加適量甘油。 ⑧復性效果的檢測根據具體的蛋白性質和需要,可以從生化、免疫、物理性質等方面對蛋白質的復性效率進行檢測。 凝膠電泳:一般可以用非變性的聚丙烯酰胺凝膠電泳可以檢測變性和天然狀態的蛋白質,或用非還原的聚丙烯酰胺電泳檢測有二硫鍵的蛋白復性后二硫鍵的配對情況。光譜學方法:可以用紫外差光譜、熒光光譜、圓二色性光譜(CD)等,利用兩種狀態下的光譜學特征進行復性情況的檢測,但一般只用于復性研究中的過程檢測。色譜方法:如IEX、RP-HPLC、CE等,由于兩種狀態的蛋白色譜行為不同。生物學活性及比活測定:一般用細胞方法或生化方法進行測定,較好的反映了復性蛋白的活性,值得注意的是,不同的測活方法測得的結果不同,而且常常不能完全反映體內活性。黏度和濁度測定:復性后的蛋白溶解度增加,變性狀態時由于疏水殘基暴露,一般水溶性很差,大多形成可見的沉淀析出。免疫學方法:如ELISA、WESTERN等,特別是對結構決定簇的抗體檢驗,比較真實的反映了蛋白質的折疊狀態。 ⑨變性的融合蛋白可以制備多抗或者單抗嗎?變性蛋白只是天然蛋白伸直的產物,用來免疫動物具有更強的抗原性。只是天然蛋白中被包在內部的抗原決定簇也會暴露出來,如果用該變性抗原制備的抗體來檢測變性抗原是可以的,如果用來檢測天然蛋白,可能會有假陽性。做單抗也可以,同樣道理,篩選出的單抗可能對抗的抗原決定簇處于天然抗原的內部,是否能用還要看將來該單抗用來干什么。 ⑩純化后的可溶性融合蛋白可以直接用于制備多抗嗎?免疫動物要求抗原體種盡量小。在這種小體積的情況下,緩沖液里的小分子成分只要沒毒影響就不大,可以不用考慮。 更多蛋白復體詳情可以上義翹神州網咨詢!
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