- 2025-01-21 09:31:07勘探開發中
- 勘探開發中是指石油、天然氣等自然資源的勘探與開發過程。勘探階段主要通過地質調查、地球物理勘探等手段尋找油氣藏；開發階段則涉及油氣田的開采、生產及后續處理。這一過程需要先進的勘探技術和高效的開發策略，以確保資源的有效開發和利用。
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- 2023-05-25 15:24:22Vi-CELL BLU細胞計數儀在工程細胞株開發中的特點和優勢
- 工程細胞株開發（Cell Line Development: CLD）的主要目的是通過高通量篩選手段獲得數個高產穩定表達的細胞株，為后續的工藝開發及優化提供基礎。能否構建適合于生產的高表達穩定細胞株，將直接影響后期重組蛋白或單克隆蛋白等藥物的開發效率和生產成本。細胞培養是細胞株開發的基礎，無論是細胞轉染、高通量克隆篩選、培養基優化、還是抗體表達，都需要在細胞培養的基礎上完成細胞生長狀態的檢測，其中包括活細胞密度（VCD）和活率（Viability）檢測。通過檢測結果將細胞密度和活率達不到要求的細胞排除掉。最 終，從數以千計的克隆細胞中篩選到穩定高產的單克隆細胞株。由于要篩選的克隆細胞量很大，對所培養的細胞生長狀態的檢測，通常需要使用高通量分析設備，有時甚至結合移液工作站來完成自動化檢測。譬如，使用96孔板檢測細胞密度和活率，同時根據需要可整合自動化移液工作站，從而大大提高篩選分析通量，并實現測試的標準化，減少人為操作誤差，最 終使我們能在有限的平臺基礎上實現高產細胞株的篩選。貝克曼庫爾特生命科學的Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀就是這樣一款滿足高通量上樣、全自動檢測，并可與自動化移液工作站整合的分析儀器。它具有以下一些優點滿足細胞株開發過程中對克隆細胞的VCD和Viability準確和快速地檢測。96孔板上樣檢測Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀除了可以使用24位轉盤做不間斷檢測外，同時可以采用96孔板進行高通量樣品分析測試（如下圖所示），使用配套的封板膜可以減少檢測過程中樣品的揮發，防止待測樣品受到外部環境的污染，對于有生物安全的細胞樣品，也可降低對操作人員的危害風險。Vi-CELL BLU 96孔板檢測照片和移液工作站整合為了解決那些重復操作、通量高、易污染、需要大量人力操作的實驗步驟，如梯度稀釋、細胞培養、細胞換液、高通量篩選、克隆挑選等步驟，從而使得上游更通暢，并保證數據的完整性，可以使用貝克曼庫爾特Biomek系列自動化移液工作站來完成這些工作。那細胞計數和活率分析操作是否也可以整合進來，讓自動化工作站控制完成相關檢測呢？答案是可以的。Vi-CELL BLU細胞計數儀可通過OPC UA Server和自動化移液工作站實現有效地整合，進一步實現細胞計數和活率分析檢測的自動化目的，避免無謂的重復實驗操作。Biomek自動化移液工作站整合Vi-CELL BLU細胞計數儀的彩頁全自動和標準化分析使用96孔板的高通量細胞計數和活率分析時，可以在Cell Type檢測參數表中設置染色前的吹打混懸次數（Aspiration cycles）和染色混合次數（Mixing cycles），以此讓儀器自動對沉降的細胞吹打均勻。然后，在保證細胞樣品均一性的前提下，吸取等體積臺盼藍吹打完成細胞的均勻染色。最 后，再通過Cell Type中的細胞識別參數，對拍攝得到的細胞進行有效地識別分析。檢測結束后儀器自動對管路清洗，接著儀器自動對下一個樣品進行標準化分析。Cell Type參數表單個樣品的百圖分析每個細胞樣品按默認Cell Type方法檢測可以得到100張細胞照片，相比于其他細胞計數儀的拍攝1張、3張或6張照片，同一樣品拍攝100張照片得到的細胞數更多，因而該細胞計數方法的系統偏差更小，測試結果的代表性更好。CHO細胞第59張照片（共100張）同一焦平面下的細胞直徑檢測細胞培養過程中平均直徑的監測通常會被忽略，同時這也是一個不太容易被細胞計數儀檢測準確的參數，但這個直徑參數有時影響會很大。在細胞轉染病毒或質粒后，一般細胞平均直徑會發生變化。有客戶發現在Fed-Batch培養過程中細胞平均直徑有時會過大，從而可能因為不耐受培養過程中的剪切力，最 終導致Peak-VCD相對其他細胞更低。Vi-CELL BLU全自動細胞計數儀通過使用聚焦質控品完成自動對焦（如下圖所示），之后細胞樣品檢測都在同一焦平面下完成。然后通過檢測L10粒徑質控標樣的平均粒徑結果是否在標稱值±10%范圍內，以此判斷自動對焦好壞。同時，可把L10粒徑質控品作為質量控制標樣，定期監測儀器對焦狀態是否正常，以此保證所有的細胞樣品都是在同一焦平面下檢測，提高細胞平均直徑檢測的準確性。聚焦質控品和儀器自動對焦示意圖同一個CHO細胞三次測試結果（考察細胞密度、活率和直徑的重復性）若您希望更多地了解Vi-CELL BLU全自動細胞計數和活率分析儀，請撥打400-821-8935和我們聯系。*本產品僅供工業和科研使用，不用于臨床診斷
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- 2022-12-07 12:03:22加速色譜分析方法開發與驗證
- 近年來USP和ICH都針對分析方法開發與驗證進行了修訂。USP新收錄通則分析方法生命周期已于2022年5月1日生效，分別從分析方法開發、分析方法性能確認及分析方法使用三個階段分別闡述如何在分析方法整個生命周期內對方法進行管理。而ICH Q14分析方法開發和Q2(R2) 分析方法驗證的修訂也進入到了第三階段，按照計劃其將在2023年5月前完成階段的定稿。這些信息都表明了分析方法開發和驗證的管理將會變得更嚴謹、更科學。因為色譜儀器包括色譜-質譜聯用技術在藥物開發過程中的廣泛使用，色譜分析方法的開發與驗證也成為了方法開發與驗證，乃至分析方法生命周期管理中的重要內容。針對色譜方法開發與驗證的整體流程，可以將其大致分為：方法篩選、方法優化、耐用性測試和完整的方法驗證這四個階段。而這四個階段都離不開儀器準備、隊列運行、數據查看與處理以及報告這幾個環節。賽默飛的旗艦版色譜數據系統Chromeleon 軟件功能豐富而注重實踐，能夠幫助實驗室的色譜分析實現精簡、高效的工作流，以實現更快的樣品到結果的轉換。自定義變量的靈活應用在Chromeleon CDS 中創建隊列時可以通過手工填寫的傳統方式，也可基于事先建好的隊列模板。值得一提的是Chromeleon 強大的樣品列表功能。除了運行樣品的基本信息（樣品名稱、儀器方法、運行的其他必須參數）之外，還可以通過自定義變量的形式，添加額外的注釋信息，例如色譜柱類型、緩沖液名稱等用于清晰識別每一針進樣的信息。使用者還可以進一步創建一些自定義變量并將其與儀器方法中的參數進行鏈接，更加簡單地實現實驗設計（DoE）的環節。一旦基本方法固定，便可通過改變色譜柱選擇閥或溶劑選擇閥等參數實現不同要素的組合以尋找具備可行性的色譜條件，也體現了ICH和USP所倡導的“多變量分析方法開發”這一方針。相比傳統的樣品隊列創建方式，減少了所需創建的儀器方法的數量，并以清晰直觀的模式展示了所使用的變量以及變量值，結合縮略圖功能提供了更直觀的信息。在數據處理階段，可以再次利用Chromeleon 樣品列表中的自定義結果變量功能，可以方便地實現運行樣品的同時進行結果計算，例如系統適用性參數的計算，峰面積、含量以及測試是否通過等信息的顯示，幫助使用者快速查看所需信息以便靈活調整實驗的方向。完全可定制的Chromeleon報告模板也支持自定義變量、公式和計算，使用者可以使用內置的模板，也可以根據需要進行調整，得到包括多個工作表、結果表和圖形的報告，無需導出到其他軟件，也無需手動計算，從而消除轉錄錯誤。所有報告和計算都可以在合規的環境中完成，并在源數據發生變化時自動更新。可以選擇在運行結束時自動打印、導出也可以發送電子郵件通知給相關人員。更便捷的eWorkflowChromeleon 也提供一個創建序列、運行并得到結果的簡單而直接的方法，這就是eWorkflow。它最 大限度地減少了操作步驟并涵蓋了色譜或 MS 工作流程的所有方面，定義了可以在哪些儀器上運行分析以及應該使用哪些方法和文件，包括儀器方法、處理方法、報告和外部文件，例如 SOP。 與前面提到的自定義變量等有效結合，只需單擊幾下即可創建復雜的序列并立即運行，并在運行后得到所需的報告。這些都可以減少錯誤、更快地產生可靠的結果，并且顯著減少了培訓的需求，有效加速了方法開發的流程。分析方法驗證工具包ICH指南定義了方法驗證應該執行包括專屬性、準確度、精密度、檢測和定量限度、線性、范圍和耐用性的測試。除了樣品運行的環節之外，計算、整理和報告驗證結果也可能需要很長的時間，而且大多數測試都涉及將結果與指標進行比較，相對比較繁瑣。 在eWorkflow的基礎上，Chromeleon 又提供了一個方法驗證的高效工具，ICH方法驗證擴展包。擴展包內有一系列的模板，每個模板都包含處理方法、報告模板和自定義變量以覆蓋所需的變量和參數。所有這些都在 eWorkflow 程序中捆綁在一起，以確保正確執行ICH所要求的相關測試，減少人為錯誤并加速流程：eWorkflow 可以引導創建隊列，自動執行所有計算，并通過報告直接顯示通過或失敗的結論。以上介紹的幾個工具僅為Chromeleon 強大功能的冰山一角。結合Chromeleon 實用的多廠商儀器控制能力，出色的系統適用性和智能運行控制功能，便捷的數據積分、處理功能，直觀的圖形化顯示，全面的合規能力，Chromeleon不但可以提升方法開發、驗證的效率，也一定能夠幫助色譜工作者執行分析方法生命周期的管理。
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- 2023-03-28 13:42:29線上直播 | 鋰離子電池開發挑戰及應對策略
- 阿美特克集團攜手旗下8大 品 牌，7位鋰電行業專家，在陽春3月為大家帶來鋰離子電池專場線上直播，針對鋰電行業痛點，提出解決方案。主題：《鋰離子電池開發挑戰及應對策略》第 一場：3月22日 - 鋰離子電池關鍵材料成份、物理及電化學性能測試(14:00-16:00)第二場：3月29日- 鋰離子電池電芯包裝阻隔性檢測/電池包連接件/電池裝配的質量控制(14:00-15:30) 直播福利：隨機抽取 20 名幸運觀眾，送《鋰電池基礎科學》或者《鈉離子電池科學與技術》識別二維碼，免費報名
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- 2022-04-14 09:24:24mRNA疫苗開發的工藝流程
- 在疫情仍未停歇的當下，做好個人防護對每個人來說既是簡單的，又是必要的。而群體防護的順利實施，則要歸功于抵抗新冠的各類疫苗了。這其中，就有免疫效果不錯的mRNA疫苗。mRNA疫苗具有廣泛的應用領域和顯著的治療優勢，因而成為諸多藥企競相追逐的熱點。本期，小編就帶大家了解一下mRNA疫苗開發的工藝流程。 01 DNA原液供應 質粒 DNA (pDNA) 是mRNA疫苗生產不可或缺的原材料，可用作 mRNA 的模板。在制備時，第一步是要提取病毒刺突蛋白的DNA序列，然后構建帶有該序列的DNA質粒，接著經過擴增、純化、質檢等諸多過程形成我們最終所需的DNA原液。 在mRNA疫苗開發應用方面，質粒生產也面臨著諸多的壓力，尤其是 GMP的壓力。 02 mRNA原液制備 體外轉錄（IVT）是mRNA原液制備的主要手段。pDNA 可作為IVT的模板，合成所需的 mRNA 分子。 IVT的工藝比較復雜，除使用pDNA外，還需要添加合成mRNA的必要成分，如核苷酸和mRNA聚合酶。為提高mRNA穩定性，降低其免疫原性，還需在 mRNA的5'末端添加加帽試劑。除此之外，合理設計5'或3'非翻譯區(UTR)也可以調整mRNA的穩定性及蛋白質的翻譯效率。 mRNA的純度影響著翻譯后蛋白的效力，因此，mRNA原液制備后的純化過程也是必不可少的，可采用TFF（切向流過濾）或SEC（尺寸排阻色譜）等方法來去除少量殘留雜質。 03 mRNA包封 為防止疫苗有效成分mRNA進入細胞前被降解，可采用脂質納米顆粒(LNP)對其進行包裹。具體過程為：將各種脂質成分按一定的比例進行混合，溶解在乙醇或其他有機溶劑中；將mRNA溶解于水中，并用酸性緩沖液稀釋至合適濃度。配置好的兩相溶液在微流控設備上進行均勻混合，快速制備包裹mRNA的核酸脂質納米顆粒。與微流控設備匹配的核心耗材為微流控芯片，圖1即為芯片內部通道示意圖。 圖1.微流控芯片通道示意圖 04 后處理 mRNA包封后需要進一步的純化。可通過超濾去除有機相以及未包封的游離成分。超濾過程中可以進行溶劑緩沖體系的置換，以及PH值的調節，最終復合物的濃度根據需求進行靈活控制。 圖2.超濾管 至于細菌、微生物的清除，一般采用0.22μm的除菌級過濾器即可。 純化后的mRNA-LNP溶液還可以添加必要的輔料成分，以提升產品長期保存的穩定性。 05 儲存運輸 mRNA疫苗布局開發過快也帶來了些不可避免的問題，即需要低溫來保持疫苗穩定，這大大的提升了對儲存和運輸的要求。在儲存運輸過程中需進行持續的溫度監測，以確保產品始終處于規定的溫度范圍，否則很難保證最終患者給藥時產品的安全性和有效性。 總結：mRNA疫苗有著廣闊的應用前景，其開發過程也必然充滿挑戰。了解開發的各個工藝流程，方能鎖定難點，各個擊破，向疫苗的成功開發更進一步。 納米藥物制備系統 應用范圍： ● 核酸藥物發展的前沿方向● mRNA疫苗的開發與挑戰● 核酸脂質納米粒科普——淺談儀器參數對結果的影響● 核酸脂質納米粒科普——超濾管規格● 核酸脂質納米粒科普——后處理 電話：021-37827858郵箱：info@nuohailifescience.com地址：上海市松江區順慶路650號1幢102、202室
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- 2022-05-19 09:29:54科學家開發重量級基因編輯工具
- 一篇在線發表于《細胞》雜志的論文介紹了一項重要突破：來自韓國的研究團隊***在線粒體DNA中實現A堿基到G堿基的轉換，為基因編輯技術填補上一塊***關重要的拼圖，也帶來了治愈多種線粒體遺傳病的希望。從上世紀60年代***發現***性內切酶，到1985年發明PCR技術，再到***近十年CRISPR技術誕生、用于活體生物的基因編輯，短短半個世紀，人類在一次又一次的突破中實現了操縱DNA能力的巨大飛躍。其中，CRISPR的出現更是讓科學家能高效編輯基因組中的致病突變，為眾多遺傳病提供全新的方案。不過，還有一朵烏云長期籠罩在基因編輯領域的上空，這就是線粒體DNA的編輯。作為參與能量代謝的重要細胞器，線粒體中也含有少量來自母系的DNA。如果這部分基因發生突變，則可能導致多種與代謝相關的遺傳疾病。例如，Leber遺傳性視神經病變（LHON）可能導致患者失明，這種兇險的疾病就是由線粒體DNA的點突變導致的。線粒體DNA突變還可能導致某些線粒體腦肌病，患者的大腦遭受損傷，可能出現癲癇、精神行為異常等癥狀。平均每5000個人里，就有一個人患上線粒體點突變導致的遺傳病。盡管基因編輯工具***近十年迎來爆發式發展，但面對線粒體遺傳病時，這些工具卻總是難以奏效。例如，當下***為盛行的CRISPR-Cas系統就因為向導RNA不能穿越線粒體膜，因而無法用于線粒體疾病。線粒體DNA的編輯，可以說是基因編輯領域***后一塊未經涉足的土地，而這個難題也成為治愈多種遺傳疾病必須跨越的障礙。2020年，一項***性的突破到來。Broad研究所的劉如謙教授團隊開發了一款名為DdCBE的基因編輯工具，可以直接修改雙鏈DNA上的堿基，實現從C堿基到T堿基的轉換，這也是科學家***在人體細胞中進行線粒體DNA的編輯。不過，作為線粒體DNA編輯的開拓性成果，DaCBE也有不足之處：其只能高效地進行TC-TT序列的轉換，在90個已知的致病線粒體突變位點中，只有9個能得到修復。而在這90個突變位點中，有多達39個都可以通過A-G堿基的轉換來修復。如果能找到實現A-G轉換的手段，那么包括上述兩種疾病在內，多種線粒體遺傳病都有望迎來治愈的方法。在這項發表于《細胞》的***新研究中，來自韓國基礎科學研究所基因編輯中心的研究團隊終于完成了這項“不可能的任務”，他們開發出一款全新的基因編輯平臺，命名為轉錄激活因子樣效應物相關脫氫酶（transcription activator-like effector-linked deaminases，簡稱TALED）。▲TALED編輯線粒體DNA的示意圖論文***作者CHO Sung-Ik表示：“我們設計的新型堿基編輯器極大地拓展了線粒體DNA編輯的范圍，這不僅有助于構建疾病模型，還將幫助人們開發新療法。”TALED到底是什么？接下來我們將看到，TALED由3個功能各異的主要部分組成，它們環環相扣、共同協作，***終完成這項基因編輯任務。***個部分，可以看作TALED的向導。前面說到，常見的基因編輯系統無法進入線粒體。為了解決這個問題，TALED與劉如謙團隊開發的DaCBE一樣，使用了轉錄激活因子樣效應物（TALE）。作為一種DNA結合蛋白，TALE蛋白能夠靶向特異的DNA序列，其在線粒體靶向序列（MTS）的引導下進入線粒體，并且與特定的線粒體DNA序列結合。到這里，TALED就被帶到了工作場所。在這里，輪到TALED的第二個部分登場。研究團隊需要找到合適的脫氫酶，在這里實現A-G堿基的轉換。為此，他們選擇是名為TadA8e的腺嘌呤脫氫酶，其由大腸桿菌的腺嘌呤脫氫酶改造而來。這個選擇頗具創意，因為TadA8e被認為是一種專門對單鏈DNA起作用的蛋白，但在這里，它需要在線粒體的雙鏈DNA中進行堿基編輯。這篇論文的通訊作者，基因編輯中心主任KIM Jin-Soo教授說：“沒有人想過用TadA8e在線粒體中進行堿基編輯，因為它被認為只對單鏈DNA起作用。正是這個跳出傳統框架的想法，幫助我們發明了TALED。”而幫助TadA8e做到這一點的，是TALED的***后一個主要部分：胞嘧啶脫氫酶DddAtox。DddAtox使得雙鏈DNA可以短暫地解開，而TadA8e正是抓住了這個轉瞬即逝的時間窗口，在人類細胞的線粒體中高效催化A-G堿基的轉換，編輯頻率可高達49%。▲TALED實現了A-G堿基的轉換通過對TALED的調整，研究團隊分別開發出能同時實現A-G以及C-T堿基轉換的技術，以及僅進行A-G轉換的技術。當然，作為一項開創性的技術，TALED仍有不***之處，例如在進行堿基編輯時，可能會造成與目標位點相鄰的核苷酸也發生轉換；此外，TALED是否會在哺乳動物細胞中產生脫靶效應也有待觀察。但毫無疑問，TALED技術的出現讓我們又多了一種***潛力的基因編輯工具，展望這項技術的未來應用場景，研究團隊希望能提升TALED的編輯效率與特異性，***終能夠分別在胚胎、新生兒與成年患者體內修正致病的線粒體突變。我們期待，那些受困于線粒體遺傳病的人們終將迎來治愈的一刻。RNA提取磁珠屬于納米生物磁珠的一種，主要作用是用于核酸提取過程中的RNA提取，粒徑分布在500nm左右，是洛陽吉恩特生物自主研發生產的高分子納米磁性微球，該磁珠懸浮時間長，磁響應時間迅速，對DNA甲基化過程中的提取環節提供良好的支持，可明顯縮短實驗時間，提高實驗效率，并在提取結果上保持穩定，配合核酸提取儀，更能實現快速的RNA提取。
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