深圳艾瑞斯生產(chǎn)的土霉素ELISA檢測試劑盒原理及用途

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法檢測組織、蜂蜜、雞蛋等樣本中的土霉素藥物（Oxytetracycline，OTC），試劑盒由預包被偶聯(lián)抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的土霉素藥物和酶標板上預包被偶聯(lián)抗原競爭抗土霉素藥物抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光度值與其所含土霉素藥物含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中土霉素藥物的殘留量。

土霉素ELISA檢測試劑盒技術指標

2.1 試劑盒靈敏度：0.05ppb(ng/ml)

2.2 反應模式：37℃，30min～30min～15min

2.3 檢測下限：

組織、肝臟、雞蛋………………0.4ppb

蜂蜜………………………………2ppb

尿樣………………………………0.5ppb

2.4 交叉反應率：

四環(huán)素………………………………100%

土霉素………………………………100%

金霉素………………………………16.7%

強li霉素……………………………4.2%

2.5 樣本回收率：

組織、肝臟、雞蛋…………85±20%

蜂蜜…………………………75±20%

尿樣…………………………80±20%

3 試劑盒組成

酶標板………………………96孔

高濃度標準品溶液1瓶：（1ml/瓶）1.0ppm（高標準液有揮發(fā)性，需注意密封）

標準品溶液0ppb、0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb、4.05ppb（均為空瓶子，現(xiàn)配現(xiàn)用）。

酶標記物（紅蓋）…………………11ml

抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml

底物液A（白蓋）……………………6ml

底物液B（黑蓋）……………………6ml

終止液（黃蓋）………………………6ml

20×濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml

5×復溶液（黃蓋）…………………50ml

說明書………………………………1份

?酶聯(lián)免疫試驗步驟

將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫平衡30min以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃。

實驗開始前需配制標準品應用液；低濃度的標準品不穩(wěn)定，需現(xiàn)配現(xiàn)用。

在0ppb的瓶中加復溶液3ml，0.05ppb、0.15ppb、0.45ppb、1.35ppb的瓶中分別加復溶液2ml，4.05ppb的瓶中加復溶液3ml。

標準液6：取1.0ppm高濃度標準品溶液12ul加入裝有3ml 復溶液4.05ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為4.05ppb。

標準液5：取1ml標準液6加入裝有2ml 復溶液1.35ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為1.35ppb。

標準液4：取1ml標準液5加入裝有2ml 復溶液0.45ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.45ppb。

標準液3：取1ml標準液4加入裝有2ml 復溶液0.15ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.15ppb。

標準液2：取1ml標準液3加入裝有2ml 復溶液0.05ppb的瓶中，蓋緊，混勻，濃度即為0.05ppb。

標準液1：直接使用復溶液，濃度即為0ppb。

1 編    號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。

2 加樣反應：加標準品應用液或樣本50μl/孔到各自的微孔中，然后加抗體工作液50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光反應30分鐘。

3 洗    滌：將孔內(nèi)液體甩干，用工作洗滌液350μl/孔充分洗滌5次，每次間隔30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。

4 加酶反應：加酶標記物100μl/孔，37℃避光反應30分鐘。

5 洗    滌：同上

6 顯    色：加底物液A 50μl/孔，再加底物液B 50μl/孔，輕輕振蕩5秒混勻，37℃避光顯色15分鐘（若藍色過淺，可適當延長反應時間）。

7 終    止：加終止液50μl/孔，輕輕振蕩混勻，終止反應。

8 測吸光值：用酶標儀于450nm處測定每孔吸光度值（建議用雙波長450/630nm）。測定應在終止反應后10分鐘內(nèi)完成