一、豬細小病毒抗體檢測試劑盒

通用名：豬細小病毒IgG抗體檢測試劑盒（酶聯免疫法）

英文名：Diagnostic Kit for Antibodies to Porcine parvovirus (ELISA)

二、包裝規格 96T×1/盒、96T×2/盒、96T*5/盒

三、預期用途 豬細小病毒（Porcine parvovirus，PPV）可引起豬的繁殖障礙病，其特征為受感染的母豬產出死胎、畸形胎、木乃伊胎及病弱仔豬。

豬細小病毒抗體試劑盒用于檢測豬血清、血漿中豬細小病毒抗體，可用于豬細小病毒疫苗免疫效果評價。

四、豬細小病毒抗體檢測試劑盒原理

豬細小病毒抗體試劑盒系由預包被豬細小病毒抗原的酶標板、酶標記物及其他配套試劑組成，應用酶聯免疫法（ELISA）原理檢測豬血清、血漿樣本中豬細小病毒抗體。實驗時在酶標板中加入對照血清和待檢樣本，經溫育后若樣品中含有豬細小病毒抗體，則將與酶標板上抗原結合，經洗滌除去未結合的其他成分后；再加入酶標記物，與酶標板上抗原抗體復合物發生特異性結合；再經洗滌除去未結合的酶標記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應形成藍色產物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關；加入終止液終止反應后，產物變為黃色；用酶標儀在450nm波長測定各反應孔中的吸光值，即可知樣品是否含有豬細小病毒抗體。

五、試劑盒組成

酶標板、酶標記物、樣品稀釋液、濃縮洗滌液、底物液A、底物液B、陽性對照、陰性對照

六、儲存及有效期

于2～8℃避光保存，有效期為12個月。

包被板開封后請于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限為2個月。

【樣品準備】

1.取動物全血按常規方法制備血清，要求血清清亮，無溶血、無污染。樣品1周內可于2～8℃保存，長期需置-20℃保存。

2.用樣品稀釋液將待檢血清按40倍稀釋（如5μl血清加入195μl樣品稀釋液中，混勻）。陰、陽性對照不用稀釋。

3.濃縮洗滌液使用前應恢復至室溫使沉淀溶解，然后用蒸餾水或去離子水作20倍稀釋成工作洗滌液(如19份蒸餾水或去離子水+1份濃縮洗滌液)。

【檢驗方法】

1.使用前將試劑盒置室溫30分鐘，恢復至室溫。

2.取所需用量酶標板條，設陰性/陽性對照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。

3.陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。

4.混勻，蓋好蓋板膜，置37℃（推薦水浴）避光反應30分鐘。

5.甩去孔內液體，每孔加350μl工作洗滌液，靜置30秒后棄去，重復洗滌5次，一次拍干。

6.每孔加酶標記物100μl，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應30分鐘。

7.洗滌，同步驟5。

8.每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，蓋好蓋板膜，置37℃避光反應10分鐘。

9.每孔加終止液50μl，混勻，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值。

【參考值】 實驗正常的情況下，陰性對照的平均OD值即ODNC應≤0.3，陽性對照的平均OD值即ODPC應≥0.6。

【檢驗結果的判定】

1.樣品的OD值即ODS；

2.閾值計算：SP值=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值≥0.2，結果判定為陽性；SP值＜0.2，結果判定為陰性。

3.本實驗結果為陰性時表明豬只抗體水平不足，建議補打相應疫苗。