本試劑盒可直接快速地對小鼠組織（如鼠尾、鼠耳、鼠趾等）樣本進行PCR擴增，具有極強的樣本兼容性。本試劑盒配備了強力的裂解緩沖液，可以快速裂解樣品，釋放基因組DNA。裂解產物可以直接加入到PCR反應體系中，無需精提純化，操作方便。此外，本試劑盒對樣品投入量要求低，2-5 mm2鼠耳或肝臟、1-5 mm鼠尾、1-2個腳趾均可進行實驗。

本試劑盒提供的2× Hieff® Tissue Direct PCR Mix為2倍濃度的熱啟動PCR反應液，包含了用于PCR擴增除模板和引物外的所有組分，大大簡化操作過程，降低污染幾率。

該試劑盒可用于轉基因鑒定、小鼠基因分型等。

產品組分

a) Lysis solution為裂解液，請戴手套操作。
b) 2× Hieff^® Tissue Direct PCR Mix：包含熱啟動Taq DNA聚合酶、dNTP混合物、4 mM Mg²⁺、PCR反應增強劑、穩(wěn)定劑等。

運輸方法

干冰運輸。

保存方法
1. 組分A：2-8℃保存，有效期1年。若長時間多次使用，請分裝后儲存，避免交叉污染。
2. 組分B/C：-20℃保存，避免反復凍融。有效期1年。

操作方法

樣品基因組DNA釋放

1. 剪取2-5 mm²鼠耳或肝臟組織，或1-5 mm鼠尾、或1-2個腳趾，置于1.5 mL離心管中；

2. 在上述離心管中加入200 μL Lysis solution和10 μL Proteinase K，輕輕渦旋混勻，使得樣品完全被浸潤，短暫離心；

3. 在恒溫孵育儀中70℃孵育10 min；

4. 孵育完成后，將樣品置于95℃或者沸水浴中加熱5 min滅活Proteinase K;

5. 將裂解產物渦旋振蕩充分混勻后，12000 rpm (13400× g)離心10 min；

6. 將上清轉移至新的離心管，-20℃保存不超過48小時或直接取上清用于后續(xù)PCR擴增。

【注】：1. 組織應盡量剪碎，以便裂解反應更順利進行。

2. 70℃孵育，一般10 min即可滿足多數PCR需求。若需要的DNA量較大或樣品較難裂解，可將時間延長至20-30 min。組織塊不需完全裂解，殘余的部分在后續(xù)離心步驟中可被除去。

PCR反應體系

【注】：各組分使用前應充分混勻。
a) 模板使用量：50 μL體系建議初步采用2 μL上清液作為模板起始投入量，若產物量較少，可適當增加模板投入量；
b) 引物終濃度：0.2-0.4 μM可以得到較好結果。反應性能較差時，可在0.1-0.5 μM范圍內調整引物濃度；
c) 反應體系：推薦使用50 μL，也可根據使用習慣調整體系體積大小；
d) 體系配制：配制好PCR反應體系，置于渦旋儀上渦旋混勻，瞬時離心將反應液集于管底。

PCR反應程序

【注】：a) 退火溫度：請參考引物的理論Tm值，退火溫度可設置低于引物理論值 2-5℃。

b) 延伸時間：1-4 kb用3-10 s/kb，4 kb以上用20 s/kb。

c) 擴增循環(huán)數：35個循環(huán)已可以擴增足量產物。

d) 電泳上樣：取5-7 μL擴增產物上樣即可。

對照反應

在PCR結果分析時，不管是陽性結果或陰性結果，如果沒有對照反應，都不能確定結果是否可靠。為了便于后續(xù)實驗結果的分析，建議在進行PCR時，設置陽性（小鼠基因組DNA）和陰性（通常為生理鹽水）PCR對照反應以便于排除假陽性或假陰性的干擾。

注意事項
1. 為了避免樣本間交叉污染，每次取樣后都需要將取樣器材的刃口或與樣本直接接觸的部位浸入2%次氯酸鈉溶液或75%酒精中，反復洗刷數次進行清洗，然后用干凈的紙巾擦干殘余液體后再進行使用。為了試驗方便，也可準備多個取樣器材，在使用完后進行統(tǒng)一清洗，確保每一單獨樣本均使用的是無污染的取樣器材。

2. 建議使用新鮮采取的動物組織，若為長期冷凍組織，應盡量避免反復凍融，否則會導致模板的降解，影響PCR效率。
3. 建議擴增片段長度6 kb以內，以便擴增效率最佳。
4. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。
5. 本產品僅作科研用途！

常見問題與解決方法

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