2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix高保真酶預混液是即用型2×預混合溶液，包含Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase，dNTP以及優(yōu)化的緩沖體系。預混液中添加了Hieff Canace® Gold High-Fidelity DNA Polymerase的熱啟動因子，極大提高了擴增的檢出率和產(chǎn)物的特異性。預混液中添加了延伸因子使得該酶具有長片段擴增能力，擴增目的片段的長度可長達10 kb，該酶具有5’→3’DNA聚合酶活性和3’→5’核酸外切酶活性，其保真性是Taq DNA聚合酶的52倍，是普通Pfu DNA聚合酶的6倍。擴增速度可達15 sec/kb。適用于復雜模板的擴增，擴增產(chǎn)物為平末端。
2×Hieff Canace® Gold PCR Master Mix具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好等優(yōu)點，反應體系只需加入引物和模板即可，并可以通過兩步法的程序進行擴增，簡化了實驗步驟，節(jié)省了時間。本產(chǎn)品中不含染料，PCR產(chǎn)物需加入Loading buffer后進行電泳。另外，該產(chǎn)品還含有特異保護劑，使得預混液反復凍融后仍可維持穩(wěn)定活性。

產(chǎn)品應用

基因克隆；復雜DNA模板擴增；高通量建庫。

運輸與保存方法

冰袋運輸。-20℃保存。有效期2年。

注意事項

1）解凍后Master Mix可能出現(xiàn)晶體沉淀，使用前務必渦旋振蕩混勻至沉淀消失，不影響試劑性能。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

3）本產(chǎn)品僅作科研用途！

推薦PCR反應體系（冰上配制）

【注】：
1）聚合酶終濃度：在1×預混液含有1 U/50 μL的聚合酶。
2）引物：PCR反應體系中引物終濃度的范圍為0.2-1 μM，推薦0.5 μM。
3）Mg2+、dNTP終濃度：在1×預混液含有1.5 mM Mg2+和200 μM的dNTP。
4）不同模板的推薦使用量（50 μL反應體系）：

PCR擴增程序：有以下三種程序可選擇，優(yōu)先選擇兩步法程序。

兩步法程序（優(yōu)先推薦）：                           

三步法程序（常規(guī)程序）：

梯度溫度退火程序（難擴增基因推薦程序）:         

【注】：
1）預變性溫度和時間：推薦溫度：98℃，時間：3 min，高GC含量模板5-10 min。
2）退火溫度和時間：推薦溫度：60℃，也可根據(jù)需要，設(shè)立溫度梯度去摸索引物退火的最適溫度。推薦退火時間設(shè)置為20 sec，可以在10-30 sec內(nèi)調(diào)節(jié)。退火時間太長可能導致擴增產(chǎn)物在膠上呈彌散狀。
3）延伸溫度和時間：推薦溫度：72℃。時間：30 sec/kb，復雜模板根據(jù)實際情況可延長至60 sec/kb。
4）擴增產(chǎn)物：請將PCR擴增產(chǎn)物放置于-20℃保存，防止該酶降解擴增產(chǎn)物。擴增產(chǎn)物為平末端。
5）不同擴增程序下的特點：       

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HB210831