產品簡介

 

MolPure® Serum/Plasma miRNA Kit適用于血漿、血清、淋巴液等樣品中總RNA和miRNA的提取。離心吸附柱中采用的硅基質材料為本公司特有新型材料，配合本公司獨特的裂解液配方可以可最大限度的回收高純度RNA和miRNA。提取的RNA純度高，質量穩定可靠，可適用于RT-qPCR等下游應用實驗。

 

產品信息

 

貨號	19332ES08 / 19332ES50
規格	5 T /50 T

 

組分信息

 

類別	組分編號	組分名稱	19332ES08	19332ES50
Part I	19332-A	裂解液LB (LB Buffer S3)	5 mL	50 mL
Part II	19332-B	RNA吸附柱S3 (MolPure® RNA Column S3)	5 個	50 個
	19332-C	miRNA吸附柱S3 (miRNA Column S3)	5 個	50 個
	19332-D	2 mL收集管 (2 mL Collection Tube S3)	10 個	100 個
	19332-E	去蛋白液PL* (PL Buffer S3*)	1.2 mL	12 mL
	19332-F	漂洗液W* (Wash Buffer S3*)	1.3 mL	13 mL
	19332-G	RNase-free H2O	1 mL	5 mL

 

儲存條件

 

Part I組分冰袋運輸，4℃避光保存。Part II組分常溫運輸，常溫保存。產品有效期12個月。

 

注意事項

 

1. 避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH值變化，各溶液使用后應及時蓋緊蓋子。

2. 漂洗液W*添加乙醇后，易形成沉淀，不影響使用。使用時，吸取上清即可。

3. 裂解液LB和去蛋白液PL*含有刺激性物質，為了您的安全和健康，請穿實驗服并佩戴一次性手套操作。

4. 本產品僅作科研用途！

 

使用說明

 

使用前準備

1. 自備設備和試劑：臺式離心機、振蕩儀、水浴鍋或金屬浴，氯仿、無水乙醇，RNase-free離心管等。

2. 除特殊指明外，所有的離心步驟均在室溫完成，使用可以達到12,000 rpm轉速的傳統臺式離心機。

3. 首次使用前，在去蛋白液PL* 和漂洗液W*瓶中參照下表加入指定體積的無水乙醇，充分混勻后使用，并做好標記。

編號	組分名稱	5 T規格無水乙醇加入量	50 T規格無水乙醇加入量
19332-E	去蛋白液PL*	2.8 mL	28 mL
19332-F	漂洗液W*	5.2 mL	52 mL

操作方法

一、樣本預處理：

1. 取250 μL血清或血漿等液體樣本轉移至1.5 mL的RNase-free離心管中。

【注】：不足 250 μL時，需用PBS或生理鹽水補足。

2. 加入750 μL裂解液LB，反復吹打，并劇烈振蕩混勻。

3. 室溫（22-30℃）靜置5 min。

4. 加入200 μL 氯仿（自備），劇烈振蕩15 sec混勻。

5. 室溫靜置2 min。

6. 4℃ 12,000rpm 離心10 min，使樣品分層。取上層水相轉移至1.5 mL的RNase-free離心管中。

【注】：樣品會分為三層，下層為有機相，中間層和上層無色的水相，RNA存在于上層水相中。

【注】：上層容量約為所加裂解液LB總量的70%。如加入750 μL 裂解液LB，上層水相約為525 μL。建議吸取500 μL，以防吸到中間層造成DNA污染。

二、（推薦）總RNA（含miRNA）提取方法：

1. 將RNA吸附柱S3套入2 mL收集管中，備用。

2. 加入1.5倍上層水相體積的無水乙醇（自備）至上層水相，吹打混勻。

【注】：出現沉淀屬正常現象。

【注】：無水乙醇必須是室溫保存。

3. 將上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉廢液。

【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。

【注】：離心后，若濾膜仍有液體殘留，可延長離心時間至5 min。

4. 加入700 μL去蛋白液PL^*，12,000 rpm離心30 sec，棄廢液。

【注】：確保去蛋白液PL^*已添加無水乙醇。

5. 將RNA吸附柱S3放回收集管，加入500 µL漂洗液W^*，12,000 rpm室溫離心30 sec，棄廢液。

【注】：確保漂洗液W^*已添加無水乙醇。

6. 重復一遍步驟5。

7. 將RNA吸附柱S3放回收集管，空柱12,000 rpm室溫離心2 min，以除去殘留的漂洗液W^*。

8. 將RNA吸附柱S3放入新的1.5 mL RNase-free離心管中，在RNA吸附柱S3中央加入30-50 µL RNase-free H₂O，室溫放置2 min。然后12,000 rpm離心1 min。收集濾液，即為RNA溶液。

【注】：可通過以下方式提高回收產量：①65℃預熱RNase-free H₂O；②將RNA濾液再次上柱，室溫放置2 min后，洗脫。

9. RNA溶液可置于-80℃長期保存。

三、僅當miRNA提取量不理想時，可嘗試用miRNA富集方法：

1. 將RNA吸附柱S3和miRNA吸附柱S3分別套入2 mL收集管中，備用。

2. 加入0.5倍上層水相體積的無水乙醇（自備）至上層水相，吹打混勻。

【注】：無水乙醇必須是室溫保存。

3. 將上述混合液加入到RNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，收集濾液。并將濾液轉移至新的RNase-free離心管中。

【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。

【注】：miRNA在濾液中，吸附柱上為去除miRNA的總RNA。

4. 計算濾液體積，加入0.65倍體積室溫保存的無水乙醇，吹打混勻。

5. 將上述混合物加入miRNA吸附柱S3中，12,000 rpm離心1 min，棄掉濾液。

【注】：混合液每次最大加入體積650 μL，可分多次離心。

【注】：離心后，若濾膜仍有液體殘留，可延長離心時間至5 min。

6. 按照總RNA（含miRNA）提取方法步驟4~9漂洗，獲取miRNA。

【注】：此操作中，步驟4~9用到的離心柱應為miRNA吸附柱S3。

 

Ver.CN20231114