- 2025-01-21 09:30:33固相萃取法
- 固相萃取法是一種樣品預處理技術，基于目標化合物與固相萃取材料間的選擇性吸附與解吸原理。它廣泛應用于環境、食品、藥物等領域的樣品凈化與富集，能有效去除干擾物，提高檢測靈敏度。固相萃取法操作簡便、耗時短、回收率高，且可自動化操作，是現代樣品前處理的重要方法之一。
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固相萃取法問答
- 2022-03-02 13:15:01Copure? MCX | 食品中4-甲基咪唑的固相萃取法
- 4-甲基咪唑（4-MI）是一種有致癌風險的污染物，常作為生產焦糖色素的副產物出現在食品中。本方案參照國標GB 5009.282-2020，采用Copure?MCX小柱，以百香果汁及蜂蜜為基質樣品，建立了不同基質中4-甲基咪唑的液相色譜-串聯質譜測定法，低、中、高三水平的加標都能獲得滿意結果。樣品提取準確稱取均勻的樣品2.0 g（精確至0.001 g）于50 mL離心管中，加入2 %甲酸水溶液至20 mL，混勻，10000 r/min離心5 min，上清液待凈化。樣品凈化活化：依次用5 mL甲醇，5 mL水活化固相萃取小柱。上樣：取待凈化樣品10 mL過柱，棄掉流出的液體。淋洗和洗脫：分別加入2 mL 2 %甲酸水、5 mL水、5 mL甲醇淋洗固相萃取小柱，棄去流出的液體；加入8 mL 5 %氨水甲醇洗脫固相萃取小柱，收集洗脫液。重新溶解：45 ℃下氮吹至近干，加入乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液1 mL復溶，渦旋30s，過0.22μm有機系濾膜，上機測試。本方案所使用儀器：BN24智能水浴氮吹儀 取適量標液，用乙腈-5 mmol/L乙酸銨（9+1）溶液稀釋成濃度分別為10 μg/L、20 μg/L、50 μg/L、100 μg/L、200 μg/L、400 μg/L的標準上機溶液。儀器條件1）色譜條件儀器：UPLC-MS/MS(Thermo Fisher TSQ Endura)色譜柱：GOWON HILIC(2.1 mm×100 mm，2.7 μm)流動相：A：5 mmol/L乙酸銨 B：乙腈洗脫方式：梯度洗脫，見表1流速：0.6 mL/min柱溫：35℃進樣量：5 μL表1 梯度洗脫程序2）質譜條件離子源：HESI電噴霧電壓：3500 V鞘氣壓力：35 arb輔氣壓力：5 arb 離子傳輸管：380 ℃輔氣溫度：350 ℃表2 組分名稱、保留時間及特征離子一覽表（*為定量離子）實驗結果表3 4-甲基咪唑加標回收實驗結果圖1 百香果汁中添加水平為100.0 μg/kg時4-甲基咪唑的離子流圖圖2 蜂蜜中添加水平為100.0 μg/kg時4-甲基咪唑的離子流圖訂購信息
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- 2021-12-13 14:58:34豬肉中喹諾酮類藥物的測定（C18固相萃取法）
- 本方案建立了以C18固相萃取柱對豬肉樣品中4種喹諾酮類藥物萃取凈化方法，進行低中高三水平基質加標，都能獲得滿意的實驗結果，回收率介于84%~115%之間，RSD值小于10 %。實驗過程樣品提取準確稱取粉碎均勻的豬肉樣品2.0 g于干凈離心管中，加入10 mL 5%甲酸乙腈溶液，再加入1 g NaCl，2500 r/min渦旋提取10 min，8000 r/min離心2 min，取上清液5 mL氮吹近干，用5 mL 5 %甲酸水溶液復溶，待凈化。樣品凈化活化：5 mL甲醇，5 mL水上樣：上述待凈化液淋洗：5 mL 10 %甲醇水洗脫：5 mL 10 %氨水甲醇收集洗脫液，氮吹近干，初始流動相復溶，上機。基質標準曲線溶液的制備選同類型空白豬肉樣品，按上述前處理方法進行操作，取適量的標液配制成合適濃度的基質曲線。儀器條件色譜條件儀器：UPLC-MS/MS（Thermo Fisher TSQ Endura）色譜柱：菲羅門 Titank C18 (2.1 mm×50 mm，3 μm)流動相：A：水（0.1 %甲酸） B：甲醇（0.1 %甲酸）洗脫方式：梯度洗脫，見表1流速：0.3 mL/min柱溫：30℃進樣量：5 μL質譜條件離子源：HESI電噴霧電壓：3500 V鞘氣壓力：40 arb輔氣壓力：2 arb 離子傳輸管：380 ℃輔氣溫度：350 ℃實驗結果表3 4種喹諾酮類加標回收實驗結果訂購信息
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- 2022-11-08 10:46:28機器人走進實驗室系列（三）固相萃取篇：Extraction+互聯設備實現全自動固相萃取工作流
- 樣品制備 — 從基質中分離出目標分析物，并盡可能去除干擾，是生物分析工作流程的關鍵組成部分。為了獲得準確、精密、可重現的實驗結果，往往需要熟練且有經驗的分析人員，因為任何錯誤或不一致都可能導致定量不準確或重做。這些錯誤或不一致包括在生成校準曲線和QC樣品時的移液錯誤、遺漏或錯誤標記的樣品、不正確的試劑添加等情況。將自動化引入生物分析實驗室不僅有助于最小化或消除這些挑戰，還可以解放分析人員的雙手，使其能夠從事其他更高價值的工作。下面小編就向大家介紹如何使用Andrew+移液機器人制備校準曲線，對QC樣品（血漿中的多種小分子藥物）進行稀釋。目標分析物包括乙酰唑胺、撲熱息痛、潑尼松、2-甲基苯甲酰胺、可的松、美托洛爾和阿米替林。然后，使用Andrew+搭配Extraction+模塊，對樣品進行全自動SPE。制備好的樣品使用LC-MS進行定量分析，獲得校準曲線結果以及重現性和回收率指標。圖1. Andrew+搭配Extraction+ SPE新模塊，執行自動化SPE樣品制備和LC-MS分析工作流，分別使用Oasis HLB SPE小柱和SPE萃取板。 優勢使用Andrew+ Robot搭配Extraction+固相萃取新模塊，可實現標準曲線制備、QC樣品稀釋和無人值守的全自動SPE工作流；OneLab軟件擁有簡潔直觀的用戶界面，便于用戶輕松設計和執行各種自動化樣品制備方案，輕松實現方法創建和方法轉移；1cc、3cc和6cc固相萃取小柱或96孔萃取板均可在Extraction+互聯設備上實現固相萃取；受OneLab軟件控制的可編程的真空泵壓力曲線可提高SPE方法的重現性。實驗方案一制備校準曲線，樣品稀釋，使用Oasis HLB 1cc SPE小柱執行固相萃取 樣品進行反相固相萃取工作流：*注意：沃特世于1996年推出Oasis HLB, 是所有Oasis吸附劑的主要成分。可耐受pH 0-14，采用獨特的水可浸潤性聚合物吸附劑，省去了活化和平衡步驟，是SPE的新標桿。以Andrew+移液機器人進行全自動SPE為例，介紹OneLab軟件中的自動化方法，Andrew+將上圖所示的SPE步驟自動化。圖2. 左側為OneLab的方法創建界面，右側為SPE工作流使用的移液槍、槍頭、Dominos和Device物料清單。Andrew+移液機器人搭載Extraction+ SPE新模塊的儀器配置如下圖，包括：Andrew+ Robot主機；微孔板抓手（自動移動96孔板）；Extraction+配套的真空泵（壓力曲線受軟件控制）；廢液瓶（上樣和清洗產生的廢液，經真空泵抽取，進入廢液瓶）；Extraction+配套的萃取套件（上部放置SPE小柱或萃取板，下部放置收集容器）；放置SPE小柱或萃取板的位置（左側升降Lifter可將承載SPE小柱的架子移到左側，以便用微孔板抓手將收集容器放入下部）。實驗結果使用 沃特世ACQUITY UPLC I-Class液相系統搭載快速柱進行色譜分離，再用 Xevo TQ-XS串聯四極桿質譜儀對從血漿中萃取出的小分子藥物進行檢測。分析3個濃度的血漿樣品(Low QC-10 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-150 ng/mL)，回收率范圍是95.8% - 108.4%，精密度結果是幾乎所有RSD%值≤5%。這些結果滿足FDA對小分子生物分析方法驗證的推薦限值。表1. 回收率和重現性結果 — Andrew+執行血漿樣品制備，Extraction+搭載Oasis HLB 1cc SPE小柱執行全自動SPE。實驗方案二制備校準曲線，樣品稀釋，使用Oasis HLB 30mg 萃取板執行固相萃取 與實驗方案一執行同樣的反相固相萃取工作流，萃取耗材是Oasis HLB 30 mg plates。 實驗結果使用沃特世ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色譜系統搭載快速柱進行色譜分離，再用Xevo TQ-XS串聯四極桿質譜儀對從血漿中萃取出的小分子藥物進行檢測。分析3個濃度的血漿樣品(Low QC-20 ng/mL, Mid QC-50 ng/mL, High QC-400 ng/mL)，回收率范圍是88.6% - 110.8%，精密度結果是大多數RSD%值≤5%。這些結果滿足FDA對小分子生物分析方法驗證的推薦限值。表2. 準確度和精密度結果 — Andrew+執行血漿樣品制備，Extraction+搭載Oasis HLB 30 mg plates執行全自動SPE。
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